小鼠肝静脉闭塞病模型的建立与评价研究
目的:利用野百合碱(monocrotaline，MCT)建立小鼠单纯肝静脉闭塞病(hepaticveno-occlusive disease，HVOD)模型，制定小鼠HVOD严重程度的评价指标，对异基因骨髓移植移植（allogeneic bone marrow transplantation，allo-BMT）并发的肝损伤进行评价。 方法:将120只雄性BALB/c小鼠随机分为6组，即正常对照组、野百合碱组(MCT组)、致死剂量全身照射组（TBI组）、TBI移植组、白消安/环磷酰胺组（BU/CY组）、BU/CY移植组;MCT组即给予野百合碱灌胃，连续灌胃三天，在第3、4、6、8和10天收取标本;TBI组在第7天收取标本，BU/CY组在第0天收取标本，TBI移植组和BU/CY移植组分别在给予TBI和BU/CY后第0天行异基因骨髓移植，移植后第15天收取标本。观察小鼠的一般状况，称取体重和肝重并计算肝脏指数，检测谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)总胆红素水平(total bilirubin，TBIL)及活化血小板比例;检测骨髓嵌合率、小鼠外周血白细胞计数、网织红细胞比例了解骨髓移植后造血重建情况;HE染色及电镜观察肝血窦变化及肝细胞损伤情况，免疫组织化学染色观察肝窦内皮细胞(Liver sinusoidal endothelialcells，LSEC)变化，Masson染色观察肝脏纤维化情况，综合上述变化并参考大鼠HVOD评分标准，制定小鼠HVOD评分标准，对allo-BMT后肝脏损伤进行综合评价。 结果:1.野百合碱特异性损伤肝窦内皮，诱导HVOD模型建立BALB/c小鼠经野百合碱连续灌胃3天后，其中有16只小鼠相关临床及病理指标符合HVOD诊断;2.依据Deleve大鼠评分标准及本实验结果，制定出小鼠HVOD评分标准野百合碱诱导的小鼠HVOD模型表现为轻、中度改变;3.TBI及BU/CY损伤肝窦内皮，破坏肝功能小鼠经TBI或BU/CY预处理后，肝功能各项指标均升高，光学显微镜及电子显微镜观察见肝细胞坏死、肝窦内皮细胞肿胀、脱落;4.异基因骨髓移植并发中至重度HVOD BALB/c小鼠经TBI、BU/CY预处理后，行异基因骨髓移植，在移植后第15天出现腹水、肝指数增加及肝功能受损，符合肝静脉闭塞病的临床表现;病理组织学观察及肝脏超微结构观察提示肝窦内皮细胞受损、血小板粘附聚集、纤维化形成等符合HVOD的病理学表现，经修改后的小鼠肝脏病理学评分界定为中至重度HVOD。 结论:1.野百合碱特异性损伤肝窦内皮，成功诱导小鼠发生HVOD;2.依据大鼠HVOD评分标准，制定出小鼠评分标准;3.TBI预处理（总剂量7.5 Gy）小鼠多表现为中至重度HVOD，无明显腹水出现;BU/CY预处理[BU(80mg/kg/d)，CY(200mg/kg/d)]小鼠多表现为重度HVOD，并可见明显腹水。
肝静脉闭塞病;异基因骨髓移植;野百合碱;肝损伤;评价标准
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
内科学(血液病学)
曾令宇;徐开林
2013
中文
R575
68
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）