木犀草素对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的保护作用及机制研究
目的：观察木犀草素对大鼠脑慢性低灌注引起的认知功能障碍的影响，并从氧化应激，炎症反应，β-淀粉样蛋白的沉积等方面研究木犀草素改善慢性脑低灌注所致大鼠认知功能障碍的作用机制。 方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术+CMC-Na组(sham)，2VO+CMC-Na组(2VO)，2VO+木犀草素50mg/kg组、2VO+木犀草素100mg/kg组、2VO+木犀草素200mg/kg组。采用永久性双侧颈总动脉结扎，制备大鼠慢性脑低灌注模型，假手术组只分离双侧颈总动脉但不结扎。模型制备4周后，开始灌胃给予CMC-Na或木犀草素。持续给药8周后，采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力的变化;采用尼氏染色观察大鼠皮质及海马组织形态学变化;分光光度法检测皮质及海马中丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)含量的变化;酶联免疫法检测皮质及海马中肿瘤坏死因子(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)及β-淀粉样蛋白(Aβ)含量的变化;免疫印迹法检测皮质及海马中NF-κB与淀粉样前体蛋白β位裂解酶-1(BACE1)的表达情况;RT-PCR法检测皮质及海马中TNF-α，IL-1β及BACE1的mRNA水平。 结果： 1.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠学习记忆能力的影响:采用Morris水迷宫实验发现，在定位航行实验中，前两天各组大鼠到达平台的潜伏期没有显著性差异。从第三天起，2VO组大鼠的潜伏期与sham组相比，显著延长（P＜0.01）。给予木犀草素后，大鼠的潜伏期显著缩短;在空间探索实验中，与sham组相比，2VO组大鼠在目标象限停留的时间百分比显著降低(P＜0.05，P＜0.01)，而与2VO相比，木犀草素各组大鼠在目标象限停留的时间百分比显著提高(P＜0.05，P＜0.01)。 2.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠皮质及海马组织形态学变化的影响:Sham组大鼠皮质及海马CA1区神经元形态正常，胞核膜和核仁清晰;2VO组大鼠海马CA1区神经元排列稀疏，细胞间隙增大，尼氏小体减少;皮质区可见局部神经元变形，但损伤不明显，木犀草素各组与2VO组相比，CA1区海马神经元排列较整齐、密集，尼氏小体较为丰富。 3.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠皮质及海马中氧化应激水平变化的影响:结果表明，慢性脑低灌注可触发一系列氧化应激反应，表现为MDA含量显著增加(P＜0.01)，SOD的活性及GSH的含量显著降低(P＜0.01)。而给予木犀草素干预后，可显著降低皮质及海马中MDA的含量(P＜0.01)，提高SOD的活性及GSH的水平(P＜0.05，P＜0.01)。 4.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠皮质及海马中炎症反应的影响:与sham组相比，2VO组大鼠皮质及海马中TNF-α与IL-1β的含量明显上升(P＜0.01)，而给予木犀草素处理后，可显著降低大鼠皮质及海马中两者的含量(P＜0.01)。 5.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠皮质及海马中Aβ含量变化的影响:与sham组相比，2VO组大鼠皮质及海马中Aβ1-40与Aβ1-42的含量明显上升(P＜0.01)，而给予木犀草素处理后，可显著降低大鼠皮质及海马中Aβ1-40与Aβ1-42的含量(P＜0.01)。 6.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠皮质及海马中NF-κB及BACE1表达的影响:免疫印迹实验结果显示，与sham组相比，2VO组大鼠皮质及海马中NF-κB及BACE1的表达显著升高(P＜0.01)，而给予木犀草素后，大鼠皮质及海马中NF-κB及BACE1的表达显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。 7.木犀草素对慢性脑低灌注大鼠皮质及海马中TNF-α, IL-1β及BACE1mRNA水平的影响:RT-PCR实验结果显示，与sham组相比，2VO组大鼠皮质及海马中TNF-α, IL-1β及BACE1 mRNA的水平显著升高(P＜0.01)，给予木犀草素后，其水平皆显著降低(P＜0.05，P＜0.01)。 结论：本实验通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑低灌注模型，研究木犀草素对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的影响，并对其机制进行了探讨。研究发现木犀草素可以改善慢性低灌注所致大鼠的认知功能障碍，这可能与其降低慢性脑低灌注大鼠海马及皮质中的氧化应激水平、炎症反应及Aβ的含量有关。
认知功能障碍;慢性脑低灌注;木犀草素;药理机制
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
药理学
刘毅
2013
中文
R277.7;R749.1;R285
61
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）