血管生成抑制剂硝羟喹啉衍生物的设计、合成及药理活性研究
文章主要从以下几方面进行了论述。 第一部分硝羟喹啉衍生物的设计与合成。 目的：在前期研究的基础上设计、合成新的硝羟喹啉衍生物。 方法：将8-羟基喹啉置于浓盐酸和37％甲醛的体系中，持续通HCl气体10h，得到5-氯甲基-8-羟基喹啉(a1)，然后和苯胺、吡啶胺等芳香胺反应得到一系列化合物。其中化合物B6和B7的合成过程不同，通过将5-氯甲基-8羟基喹啉改变成5-胺甲基-8羟基喹啉，然后和4-三氟甲基苯甲酰氯、4-三氟甲基苯磺酰氯反应得到目标化合物B6和B7。纯化后通过核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance，NMR)扫描鉴定其结构，通过高效液相色谱(high-performance-liquid chromatography，HPLC)检测其纯度，控制纯度＞95％。用于初步药理研究的化合物A6并通过红外光谱(infrared spectra，IR)扫描、紫外光谱扫描(utlraviolet，UV)，液相-串联质谱(liquid chromatograph-mass spectrometer，LC-MS)进一步鉴定化合物的结构，并通过高效液相色谱仪检测化合物的纯度，控制纯度＞99％。 结果：合成化合物通过HPLC测试纯度均大于95％，并通过NMR扫描鉴定结构的正确性。通过UV扫描、IR扫描、LC-MS测试进一步验证化合物A6结构正确，并通过HPLC测试纯度为99.05％。 结论：合成设计思路正确，合成的硝羟喹啉衍生物纯度合格，可以用于药理活性初筛实验。 第二部分硝羟喹啉衍生物的活性初筛及化合物A6的初步药理活性研究。 目的：将合成的衍生物进行活性初筛，筛选出活性较好的化合物A6;在此基础上，进一步对化合物A6进行初步的药理活性研究。 方法：通过[3H]-thymidine掺入法实验考察已合成硝羟喹啉衍生物对HUVEC增殖能力的影响，筛选活性较好化合物，并根据筛选结果选择化合物A6进行初步的药理活性研究。常规培养HUVEC细胞，采用MTT实验考察化合物A6对细胞活力的抑制作用。设定Control组(DMSO，20μmol/L)、Nitroxoline组(Nitroxoline5μmol/L)、低剂量组(2.5μmol/L)、中剂量组(5μmol/L)和高剂量组(10μmol/L)5个组别进行研究。给予处理培养24h后，光镜下观察化合物A6对HUVEC形态的影响;采用DAPI染色法观察给予化合物A6后HUVEC细胞核的变化情况;Annexin V/PI双染法考察化合物A6诱导HUVEC凋亡的作用;Western blot法检测HUVEC内caspase-3/cleaved caspase-3的蛋白表达情况;Brdu增殖试剂盒测试化合物A6对HUVEC增殖能力的影响。 结果： 1.[3H]-thymidine掺入法实验进行活性初筛 [3H]-thymidine掺入法实验筛选的第一批化合物中化合物A6活性较好，对HUVEC细胞24h的IC50值为1.70μmol/L;第二批化合物中化合物B5、B9、B4、B10活性较好，其24 h的IC50值分别为0.679μmol/L、0.644μmol/L、1.03μmol/L、1.51μmol/L。 2.不同处理后，HUVEC细胞形态的变化 Control组单个细胞形态正常，轮廓清晰，多个细胞呈现“铺路石”状排列，中、高剂量组和Nitroxoline组细胞有部分变圆、浮起、细胞间接触变松。 3.不同处理后，DAPI染色观察HUVEC细胞核的变化 Control组细胞核染色质均匀，核形完整;中、高剂量组和Nittoxoline细胞核内染色质出现不同程度的凝集，核形不完整，核内出现高亮的颗粒物质。 4.不同处理后，Annexin V/PI双染法流式细胞术考察HUVEC凋亡情况 与Control组相比，中、高剂量组凋亡率明显提高（P＜0.01）;与Nitroxoline组相比，高剂量组凋亡率明显提高(P＜0.05)。 5.不同处理后，Western blot法检测HUVEC内caspase-3/cleaved caspase-3蛋白表达情况 与Control组相比，高剂量组caspase-3的蛋白表达量显著降低(P＜0.05)，中、高剂量组cleaved caspase-3的蛋白表达量显著升高(P＜0.05; P＜0.01)，且中、高剂量组与Nitroxoline组比较，cleaved caspase-3的蛋白表达含量显著增高(P＜0.05;P＜0.01)。 6.Brdu增殖实验考察不同处理后，HUVEC增殖情况 与Control组相比，Nitroxoline组、低、中、高剂量组均能抑制HUVEC增殖(P＜0.05，P＜0.01)，且高剂量与Nitroxoline组相比，抑制作用明显增强(P＜0.05)。 结论：合成的硝羟喹啉衍生物中化合物A6、B5、B9、B4、B10活性较好，且化合物A6能够抑制HUVEC细胞增殖，并能诱导其产生凋亡。
硝羟喹啉衍生物;血管生成抑制剂;合成工艺;药理活性
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
药理学
印晓星;徐炜政
2013
中文
R966
88
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）