Ghrelin/GHSR-1a信号系统对神经病理性疼痛的调控作用及相关机理研究
文章主要从以下几方面进行了论述。 第一部分:Ghrelin及其受体GHSR-1a在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角的表达。 目的：研究Ghrelin及其受体GHSR-1a在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角的表达情况。 方法：采用坐骨神经结扎损伤模型(CCI)，雄性SD大鼠随机分为5组(n=6):正常对照组、7天假手术组、7天CCI模型组、14天假手术组、14天CCI模型组。各组大鼠均于术前1天、术后1、3、5、7和14天，分别用VonFrey法和Hargreaves法检测大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。用RT-PCR法检测L4-6段脊髓背角匀浆液中的Ghrelin及GHSR-1amRNA表达，Western blot法检测L4-6段脊髓背角匀浆液中的Ghrelin及GHSR-1a蛋白表达，ELISA法检测L4-6段脊髓背角匀浆液中的Ghrelin表达水平。 结果：CCI组大鼠在术后1天出现机械刺激缩足反射阈值和热缩足潜伏期均降低的情况，与基础值和假手术组相比，在术后3、5、7和14天显著性降低(P＜0.05);与正常组和假手术组相比，术后7天和14天的CCI组大鼠脊髓背角Ghrelin及其受体GHSR-1a的mRNA及蛋白表达水平均有显著性降低（P＜0.05）。 结论：Ghrelin及其受体GHSR-1a在各组大鼠脊髓背角中均有表达，且与假手术组相比，CCI大鼠脊髓背角的Ghrelin及其受体GHSR-1a表达均有显著性降低。 第二部分:鞘内注射Ghrelin对大鼠神经病理性疼痛的影响。 目的：探讨Ghrelin/GHSR-1a信号系统对CCI大鼠神经病理性疼痛的调控作用及相关机理。 方法：雄性SD大鼠随机分为7组(n=6-7):正常对照组、假手术组、CCI模型组、Ghrelin低剂量组、Ghrelin中剂量组、Ghrelin高剂量组、Ghrelin受体拮抗剂组。各组大鼠均于坐骨神经结扎后一天开始鞘内给药，Ghrelin低、中、高剂量分别给予1、3、10μg的Ghrelin，Ghrelin受体拮抗剂组先鞘内注射50μg的[D-Ly3]-GHRP-6，30min后再鞘内注射10μg的Ghrelin，其余各组分别鞘内注射等体积溶媒，共给药7天。各组大鼠于术前1天、术后1、3、5和7天给药后，分别用VonFrey法和Hargreaves法检测大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)，术后7天取材。用Western blot法和免疫组化法检测L4-6段脊髓背角p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化情况，ELISA法检测L4-6段脊髓背角匀浆液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。 结果：1.鞘内注射中、高剂量的Ghrelin在术后3、5和7天均不同程度显著延迟了CCI大鼠热痛敏和机械痛敏的形成(P＜0.05)，而低剂量组仅在术后5、7天显著延缓了CCI大鼠热痛敏的形成(P＜0.01)，并且Ghrelin受体拮抗剂组在术后3、5和7天均能显著阻断Ghrelin高剂量组对神经病理性疼痛的拮抗作用(P＜0.05)。2.Western blot结果显示:术后7天，p-p38 MAPK和胞核NF-κB p65在各组脊髓背角均有表达。与假手术组相比，CCI组的表达均显著性增高(P＜0.01);与CCI组相比，Ghrelin低剂量组有降低的趋势，中、高剂量组均有显著性降低(P＜0.05);并且Ghrelin高剂量组抑制p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的作用被Ghrelin受体拮抗剂组显著性阻断(P＜0.05)。3.免疫组化染色显示:术后7天，胞浆和胞核p-p38 MAPK及胞核NF-κB p65在各组脊髓背角均有表达。与假手术组相比，CCI组的表达均有显著性增加(P＜0.01);与CCI组相比，Ghrelin低、中、高剂量组的表达均是显著性降低(P＜0.05);并且Ghrelin高剂量组抑制p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的作用被Ghrelin受体拮抗剂组显著阻断(P＜0.01)。4.术后7天，CCI组大鼠脊髓背角的IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著高于假手术组(P＜0.01);Ghrelin低、中、高剂量组均显著低于CCI组(P＜0.05);而这些促炎细胞因子在Ghrelin高剂量组中的含量均显著低于Ghrelin受体拮抗剂组(P＜0.01)。 结论：Ghrelin能显著抑制CCI大鼠脊髓背角p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化，减少促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌，从而发挥缓解CCI大鼠神经病理性疼痛的效应。
神经病理性疼痛;内源性脑肠肽;GHSR-1a受体;脊髓背角
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
药理学
武玉清;邢淑华
2013
中文
R741
70
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）