四氢生物蝶呤对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质的影响
目的：研究高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells，MCs)中四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）的变化;进一步探讨一氧化氮合酶(NitricOxide Synthas，NOS)和一氧化氮(nitric oxide，NO)对细胞增殖和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的影响。 方法：大鼠肾小球系膜细胞同步化培养后分为正常糖浓度组(NG组，5.56mmol/L葡萄糖)、甘露醇对照组(MA组，5.56 mmol/L葡萄糖+19.44 mmol/L甘露醇)、高糖组（HG组，25 mmol/L葡萄糖）、过氧化氢组(H2O2组，5.56 mmol/L葡萄糖+10-5mol/LH2O2)、抗氧化剂组(HG+NAC组，25 mmol/L葡萄糖+50μmol/LNAC)、BH4组（BH4组，5.56 mmol/L葡萄糖+100μmol/L BH4）、BH4抑制剂组（HG+DAHP组，25 mmol/L葡萄糖+2 mmol/L DAHP）、iNOS抑制剂组(HG+1400W组，25 mmol/L葡萄糖+10μmol/L1400W)和NO供体组（SNP组，5.56 mmol/L葡萄糖+100μmol/LSNP）。各组细胞分别培养16h后，应用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FL)法检测细胞内BH4水平;用DAF-FM DA探针法测定细胞内NO的水平，Griess试剂显色法测定细胞外NO水平;western blot法测定细胞中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)、神经元型一氧化氮合酶（neuronal Nitric Oxide Synthase，nNOS）和内皮型一氧化氮合酶(endothelial NitricOxide Synthase，eNOS)的蛋白表达水平，生物化学法检测iNOS的酶活性;酶联免疫吸附法（ELISA法）测定大鼠Ⅳ型胶原（Collagen type four，ColⅣ）和层黏蛋白(Laminin，LN)的水平;Brdu显色法测定吸光度OD值反映细胞增殖能力。 结果：所有结果均显示，NG组与MA组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05);HG组与H2O2组比较，差异也均无统计学意义(P＞0.05)，其余各组相关指标变化如下: 1.BH4含量的变化 与NG组比较，HG组及H2O2组BH4水平均显著增高，差异有统计学意义(P＜0.01);与HG组比较，HG+NAC组及HG+DAHP组BH4水平显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。 2.iNOS、nNOS、eNOS蛋白表达以及iNOS酶活性的变化 与NG组比较，HG组、H2O2组及BH4组，iNOS蛋白表达均显著增加，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)，nNOS及eNOS的蛋白表达无显著性升高（P＞0.05）;与HG组比较，HG+NAC组，iNOS蛋白表达显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)，nNOS及eNOS的蛋白表达无显著性降低(P＞0.05)。与NG组比较，HG组、H2O2组及BH4组，iNOS酶活性均显著增加，差异有统计学意义(P＜0.01);与HG组比较，HG+NAC组，iNOS酶活性显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。 3.NO水平的变化 结果显示各处理组细胞内NO水平的变化与细胞外NO水平变化一致。与NG组比较，HG组、H2O2组及BH4组细胞内外NO水平均显著增高，差异有统计学意义(P＜0.01);与HG组比较，HG+NAC组、HG+1400W组及HG+DAHP组，NO水平均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。 4.ColⅣ和LN水平的变化 与NG组比较，HG组、H2O2组、BH4组及SNP组ColⅣ和LN的水平均显著增加，差异有统计学意义(P＜0.01);与HG组比较，HG+NAC组、HG+DAHP组及HG+1400W组，ColⅣ和LN的水平均显著减少，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)。 5.细胞增殖能力的变化 与NG组比较，HG组、H2O2组、BH4组及SNP组的细胞增殖能力均显著增加，差异有统计学意义(P＜0.01);与HG组比较，HG+NAC组、HG+DAHP组及HG+1400W组细胞增殖能力均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。 结论： 高糖培养的大鼠MCs中BH4水平升高是造成iNOS和NO水平增高，最终导致细胞增殖、细胞外基质增多的上游因子。
肾小球系膜细胞;高糖环境;四氢生物蝶呤;细胞增殖;细胞外基质
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
药理学
印晓星
2013
中文
R692.02
60
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）