Salusins对人脐静脉内皮细胞炎症反应的影响及其信号转导机制
目的:探讨心血管活性肽Salusins对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症反应的影响及其信号转导机制。 方法：体外培养HUVEC株，按照如下分组给予不同的处理。Salusin-α细胞分组及给药如下:1.正常对照组:只给予PBS处理;2.LPS组:给予PBS预孵24h后，再加入10μg/ml LPS刺激;3.Salusin-α10 nM+LPS组:给予终浓度为10 nM的Salusin-α预孵24 h后，再加入10μg/ml LPS刺激;4.Salusin-α1 nM+LPS组:给予终浓度为1nM的Salusin-α预孵24 h后，再加入10μg/ml LPS刺激;5.Salusin-α0.1 nM+LPS组:给予终浓度为0.1nM的Salusin-α预孵24 h后，再加入10μg/mlLPS刺激。 Salusin-β细胞分组及给药如下:1.正常对照组:只给予PBS处理;2.溶媒对照组:给予0.1％DMSO预孵2h后，再加入PBS处理;3.Salusin-β10 nM组:给予0.1％DMSO预孵2h后，再加入终浓度为10nM的Salusin-β刺激24 h;4.Salusin-β1nM组:给予0.1％DMSO预孵2h后，再加入终浓度为1nM的Salusin-β刺激24h;5.Salusin-β0.1 nM组:给予0.1％DMSO预孵2h后，再加入终浓度为0.1 nM的Salusin-β刺激24 h;6.p38MAPK抑制剂SB203580+ Salusin-β10 nM组:给予10μMSB203580预孵2h后，再加入终浓度为10nM的Salusin-β刺激24 h;7.JNK抑制剂SP600125+ Salusin-β10 nM组:给予20μMSP600125预孵2h后，再加入终浓度为10nM的Salusin-β刺激24 h。 各组给予不同的处理后，采用ELISA法检测HUVEC培养上清液中IL-6和TNF-α的水平;Western blot和Real-time PCR方法检测VCAM-1和MCP-1蛋白和mRNA的表达;Western blot方法检测I-κBα蛋白表达和NF-κBp65活化情况;免疫细胞化学染色方法检测NF-κ Bp65活化情况;Western blot方法检测JNK、p38MAPK磷酸化蛋白表达。 结果： 1.HUVEC培养上清液中IL-6、TNF-αt含量的变化 ELISA结果显示，Salusin-α对LPS诱导的IL-6、TNF-α的分泌几乎无影响。10 nM Salusin-β能明显促进HUVEC分泌IL-6和TNF-α（P＜0.05，P＜0.01），1nMSalusin-β也可以明显促进IL-6的分泌(P＜0.05);而p38MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125可以抑制10 nM Salusin-β引起的TNF-α的释放(P＜0.05或P＜0.01)，但对IL-6的释放虽有降低趋势但无统计学意义。 2.VCAM-1、MCP-1蛋白和mRNA表达水平的变化 Western blot和real-time PCR结果显示，Salusin-α对LPS诱导的MCP-1蛋白和mRNA表达、VCAM-1 mRNA表达几乎无影响，差异无统计学意义，但10nM和1 nM Salusin-α可抑制LPS诱导的VCAM-1蛋白表达(P＜0.05)。Salusin-β不同浓度组可以不同程度地促进HUVEC中VCAM-1和MCP-1的蛋白和mRNA表达（P＜0.05，P＜0.01）;p38MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125可以抑制10 nM Salusin-β引起的VCAM-1和MCP-1蛋白和mRNA表达的增加(P＜0.05，P＜0.01)。 3.NF-κB和I-κ Bα蛋白表达水平的变化 Western blot结果显示，Salusin-α不能拮抗LPS引起的I-κBα表达的降低和NF-κ Bp65表达的升高。10 nM Salusin-1β能明显降低I-κ Bα的表达，增加NF-κ Bp65的表达(P＜0.01)，1 nM Salusin-β能降低I-κBα的表达(P＜0.05); p38MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125可以抑制10 nM Salusin-β引起的I-κ Bα表达的降低和NF-κBp65表达的增加(P＜0.05，P＜0.01)。免疫细胞化学染色结果也显示，Salusin-α对LPS诱导的NF-κ Bp65的活化几乎无影响;Salusin-β10 nM可使HUVEC中NF-κBp65核阳性细胞百分率明显增加(P＜0.05); p38MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125均可降低HUVEC中NF-κBp65核阳性细胞百分率（P＜0.05）。 4.磷酸化p38 MAPK和磷酸化JNK蛋白表达水平的变化 Western blot结果显示，Salusin-α对LPS诱导的p38MAPK和JNK的活化无统计学意义;10 nM Salusin-β可增加HUVEC中磷酸化p38MAPK和磷酸化JNK的蛋白表达(P＜0.05)，其这一作用可分别被p38MAPK抑制剂SB203550和JNK抑制剂SP600125所拮抗(P＜0.05)。 结论： 在本实验条件下得出以下结论: 1.Salusin-α对LPS诱导的炎症反应没有明显的影响，其抗AS的机制尚需进一步研究; 2.Salusin-β可明显促进HUVEC表达和分泌炎症因子，其机制可能至少与p38MAPK/NF-κB通路和JNK/NF-κB通路有关。
心血管活性肽;人脐静脉内皮细胞;炎症反应;信号转导机制
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
药理学
周成华;刑淑华
2013
中文
R541.402
68
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）