Salusins对Apoe-/-小鼠动脉粥样硬化形成及血管炎症反应的影响
文章主要从以下几方面进行了论述。 第一部分Salusins对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响。 目的：探讨心血管活性肽salusin-α和-β对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响。 方法：将21只六周龄SPF级健康雄性ApoE-/-小鼠（与C57BL/6J小鼠具有相同的遗传背景）随机分为三组:模型组、salusin-α组、salusin-β组，另取7只六周龄雄性C57BL/6J野生型小鼠作为正常对照组，均喂以高脂饲料（含有0.15％的胆固醇和21％的脂肪）促进AS的形成。在salusin-α组和salusin-β组小鼠皮下分别植入载有salusin-α和-β的渗透性微量泵，按照0.6 nmol/kg/h的剂量给药，模型组和正常对照组则给予相应体积的生理盐水，每两周更换一次新泵，8周后处死各组小鼠，检测小鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;采用HE染色和油红O染色分析各组小鼠主动脉AS斑块病变情况。 结果：1.Salusins对小鼠血浆中血脂水平的影响模型组小鼠血浆中TG、TC、LDL-C和HDL-C的浓度分别为(1.68±0.27) mmol/L，(20.96±1.78) mmol/L，(18.88±1.57) mmol/L，（0.70±0.11）mmol/L，与正常对照组相比，除HDL-C水平明显降低外，其余血脂水平均显著升高(P＜0.01); salusin-α组小鼠血浆中TG、TC、LDL-C和HDL-C的浓度分别为（1.60±0.26）mmol/L，(19.45±0.94) mmol/L，(16.76±0.87) mmol/L，（0.89±0.14）mmol/L，与模型组相比HDL-C的含量明显升高(P＜0.05)，其它血脂水平虽然有所改善，但变化无统计学意义;salusin-β组小鼠血清中TG、TC、LDL-C和HDL-C的浓度分别为（1.46±0.18）mmol/L，(21.88±1.78) mmol/L，(19.66±1.66) mmol/L和（0.62±0.15）mmol/L，与模型组相比无统计学意义。 2.Salusins对小鼠血管壁脂质沉积的影响油红O染色结果表明，正常对照组几乎没有出现脂质沉积，模型组的斑块面积/内膜面积比值明显高于正常对照组(＜0.01);注射salusin-β可使病变处脂质沉积更为严重，斑块面积/内膜面积比值明显高于模型组，差异有统计学意义(P＜0.01);相反，注射salusin-α后斑块面积/内膜面积比值较模型组有明显的减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。 3.Salusins对小鼠血管壁病理改变的影响HE染色结果显示，正常对照组小鼠的内膜表面光滑平整，无增厚;ApoE-/-小鼠血管壁均形成明显的AS斑块，内膜明显增厚，有纤维帽形成，斑块中含少量胆固醇结晶;salusin-α可使病变程度减轻，部分出现少量纤维斑块和内膜增厚;而与模型组比较，salusin-β组小鼠AS斑块体积增大，内膜增厚更明显，斑块内可见大量胆固醇结晶。 结论：在本部分实验条件下得出以下结论: 1.给予外源性的salusin-β对ApoE-/-小鼠血脂水平无显著性的影响，而salusin-α则可以升高ApoE-/-小鼠血浆HDL-C水平。 2.外源性的salusin-α可明显抑制ApoE-/-小鼠主动脉AS的形成，而salusin-β则可以明显加重ApoE-/-小鼠主动脉AS病变情况。 第二部分Salusins对ApoE-/-小鼠血管炎症反应的影响。 目的：分别探讨心血管活性肽salusin-α和-β对ApoE-/-小鼠血管炎症反应的影响。 方法：21只六周龄雄性ApoE-/-小鼠（与C57BL/6J小鼠具有相同的遗传背景）以及7只六周龄C57BL/6J正常对照组小鼠均给予高脂饮食造模8周以促成动脉粥样斑块的形成。8周后处死各实验组小鼠。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组小鼠血浆中IL-6和TNF-α的水平;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR) 检测各组小鼠主动脉中MCP-1、VCAM-1的mRNA表达;采用免疫组化染色技术检测小鼠主动脉中MCP-1、VCAM-1、NF-κB p65的蛋白表达;采用western-blot方法检测小鼠主动脉中VCAM-1、IκBα的蛋白表达情况。 结果：1.Salusins对小鼠血浆中IL-6、TNF-α水平的影响ELISA结果显示，模型组小鼠血浆中IL-6、TNF-α的水平明显高于正常对照组(P＜0.01);与模型组相比，salusin-α明显降低ApoE-/-小鼠血浆中IL-6、TNF-α的水平(＜0.01);相反，持续给予salusin-β可使ApoE-/-小鼠血浆中IL-6、TNF-α的水平显著增加，差异具有统计学意义（P＜0.01）。 2.Salusins对小鼠主动脉中VCAM-1和MCP-1 mRNA表达的影响Real-timePCR结果显示:与正常对照组相比，VCAM-1和MCP-1的mRNA表达在模型组小鼠主动脉中均明显增加（P＜0.01）;与模型组相比，salusin-α对小鼠主动脉中VCAM-1和MCP-1的mRNA表达几乎无影响，差异无统计学意义;而连续注射salusin-β后，ApoE-/-小鼠主动脉中VCAM-1和MCP-1的mRNA表达均显著增加（P＜0.01）。 3.Salusins对小鼠主动脉中VCAM-1和MCP-1蛋白表达的影响免疫组化染色结果显示:正常对照组小鼠血管壁未见明显的VCAM-1和MCP-1的阳性染色，而模型组小鼠血管壁可见明显的VCAM-1和MCP-1的阳性表达，与正常对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01); salusin-α组与模型组比较，主动脉中VCAM-1和MCP-1的阳性染色虽略有减弱，但均无显著性差异;相反，salusin-β组小鼠主动脉中VCAM-1和MCP-1的阳性染色明显增强(P＜0.01，P＜0.05)。Western-blot结果同样证实，模型组小鼠主动脉中VCAM-1的蛋白表达明显高于正常对照组(P＜0.01);与模型组相比，salusin-β能明显增强ApoE-/-小鼠主动脉中VCAM-1的蛋白表达(P＜0.01);而salusin-α对ApoE-/-小鼠主动脉中VCAM-1的蛋白表达几乎无影响。 4.Salusins对小鼠主动脉中NF-κBp65蛋白表达的影响NF-κ Bp65的免疫组化染色结果表明:正常对照组小鼠血管壁细胞几乎无NF-κ Bp65的激活;在模型组小鼠血管壁部分内皮细胞及平滑肌细胞中有明显的细胞核棕黄色阳性染色，与正常对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）;注射salusin-β的小鼠血管壁NF-κBp65阳性细胞染色率显著高于模型组(P＜0.05);而salusin-α组NF-κ Bp65阳性细胞染色率与模型组相比无统计学差异。 5.Salusins对小鼠主动脉中IκBα蛋白表达的影响IκBα的western-blot结果显示:模型组小鼠主动脉中IκBα的蛋白表达明显低于正常对照组(P＜0.01); salusin-α组小鼠主动脉中IκBα的蛋白表达与模型组相比无统计学意义;而连续注射salusin-β后小鼠主动脉中IκBα的蛋白表达明显低于模型组（P＜0.05）。 结论：在本部分实验条件下得出以下结论: 1.与正常小鼠相比，AS模型小鼠血管壁炎症因子的表达显著增加。 2.Salusin-α可降低ApoE-/-小鼠血浆IL-6、TNF-α的水平，但对血管壁其他炎症因子的表达无显著影响，说明salusin-α对ApoE-/-小鼠血管壁炎症反应的抑制作用不明显，其可能通过其他机制抑制AS的形成。 3.Salusin-β则可使ApoE-/-小鼠血管壁炎症因子的表达明显增加，其机制可能与salusin-β促进IBα的降解，进一步活化NF-κB通路有关，这可能是salusin-β促进ApoE-/-小鼠AS的发生发展机制之一。
动脉粥样硬化;心血管活性肽;ApoE基因;血管炎症反应
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
药理学
周成华;刑淑华
2013
中文
R541.402
68
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）