过表达Olig2促进大鼠羊膜上皮细胞向少突胶质细胞分化的研究
目的：观察Olig2基因过表达rAECs向少突胶质细胞分化情况。 方法：从妊娠14～16d的SD大鼠胎盘中剥离羊膜，用胰蛋白酶消化法进行大鼠羊膜上皮细胞原代培养，使用Nestin、CD29和CD44等抗体通过免疫细胞化学和流式细胞术对细胞进行生物学鉴定。以新生大鼠脊髓组织中提取的总RNA为模版，采用RT-PCR方法获得目的基因片段。通过公司构建Olig2质粒并进行测序验证。使用脂质体法将重组体pEGFP-N1-Olig2转染rAECs，利用免疫细胞化学法检测转染后rAECs中Olig2蛋白和少突胶质细胞蛋白4(oligodendrocyte4，O4)的表达水平，结果采用SPSS13.0统计软件进行分析，数据以“均数±标准差”(means±SD)表示，组间比较采用单因素方差分析(One-Way-ANOVA)，多个实验组和一个对照组比较采用最小显著差法(LSD)。P≤0.05表示差异有统计学意义。 结果：1.培养的大鼠羊膜上皮细胞表达神经前体细胞特异性蛋白Nestin和骨髓间充质干细胞表面标记蛋白CD29和CD44，但是未成熟神经元标记蛋白β-Ⅲ-tublin、星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein，GFAP)以及造血干细胞表面标记蛋白CD34表达阴性。2.成功构建过表达重组体pEGFP-N1-Olig2，测序分析证实了序列的正确性。3.免疫荧光细胞化学证实pEGFP-N1-Olig2成功转染rAECs;与对照组比较Olig2和少突胶质细胞标记蛋白O4阳性表达细胞增多，差异有统计学意义(P＜0.01)。 结论：Olig2过表达rAECs可向少突胶质细胞分化，为进一步的细胞移植治疗脊髓损伤引起脱髓鞘病变提供理想种子细胞。
Olig2基因;羊膜上皮细胞;少突胶质细胞;细胞生物学
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
人体解剖与组织胚胎学
王德广;曲德伟
2013
中文
R329.28
52
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）