雌激素通过平衡Gi/Gs蛋白信号通路减少Takotsubo心肌病发病的研究
目的：本研究通过在细胞水平建立Takotsubo心肌病细胞模型，初步探讨雌激素对Takotsubo心肌病是否有保护作用，并进一步探讨这种保护作用是否与Gi-PI3K-PKB/Gs-AC-cAMP-PKA信号通路有关，探索绝经后雌激素下降Takotsubo心肌病高发的原因。 方法：将成年雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)和双侧卵巢切除术(OVX)组，术后六周，分离心肌细胞。首先，给予高浓度肾上腺素制备Takotsubo心肌病细胞模型，通过测定各组心肌细胞收缩幅度、心肌细胞杆状率、培养基中乳酸脱氢酶(LDH)和脑尿钠肽(BNP)含量及环磷酸腺苷(cAMP)释放量，以观察高浓度肾上腺素对各组心肌细胞收缩功能、心肌损伤、心肌细胞存活率等的影响。其次，分别给予上述两组细胞加PTX（1.5μg/ml）或LY294002(50μM)阻断Gi-PI3K-PKB信号通路的Gi蛋白和PI3K位点，观察阻断Gi-PI3K-PKB信号通路后，高浓度肾上腺素对心肌细胞收缩功能、心肌损伤、心肌细胞存活率等的影响。最后，给予SQ22，536(50μM)阻断Gs-AC-cAMP-PKA信号通路的AC位点后，观察高浓度肾上腺素对各组心肌细胞收缩功能、心肌损伤、心肌细胞存活率的影响。 结果：1.在未给予高浓度肾上腺素的正常情况下，与Sham组相比OVX组单个心肌细胞的收缩幅度明显升高，但两组间心肌细胞的杆状率、LDH和BNP的释放量没有统计学差异。给予高浓度肾上腺素制备Takotsubo心肌病细胞模型后，两组心肌细胞的收缩幅度均明显下降，但OVX组心肌细胞收缩幅度下降的比率更明显;两组间杆状率均显著下降，两组间LDH和BNP的释放均明显增加，与Sham+ Epi组相比较OVX+ Epi组杆状率更低、LDH和BNP的释放更高，即雌激素能减轻高浓度肾上腺素对心肌细胞的损伤。2.阻断Gi-PI3K-PKB信号通路后，各组细胞收缩幅度明显上升，高浓度肾上对心肌细胞收缩的抑制效应消失;LDH和BNP释放量增加，细胞杆状率下降;两组细胞间的差异性被取消，雌激素减轻高浓度肾上腺素对心肌细胞损伤的效应消失。3.在未给予高浓度肾上腺素的正常条件下，OVX组心肌细胞cAMP浓度高于Sham组;但给予高浓度肾上腺素后，Sham组cAMP浓度增加，而OVX组cAMP浓度下降，Sham组心肌细胞cAMP浓度高于OVX组。高浓度肾上腺素取消了雌激素对cAMP的抑制，cAMP的释放量增加。给予SQ22，536阻断Gs-AC-cAMP-PKA信号通路的AC位点后，各组细胞收缩幅度无明显变化，但高浓度肾上腺素对心肌细胞的损伤增大，Sham组和OVX组心肌细胞的LDH和BNP释放量均显著增加，细胞杆状率明显下降，并且高浓度肾上腺素对Sham组和OVX组心肌细胞细胞损伤程度间的差异性消失，雌激素减轻高浓度肾上腺素对心肌细胞损伤的效应消失。 结论：1.雌激素能减少高浓度肾上腺素对心肌细胞损伤，对心肌细胞具有保护作用。2.在TCM细胞模型中，雌激素对心肌细胞的保护效应与Gi-PI3K-PKB/Gs-AC-cAMP-PKA蛋白信号通路有关。3.高浓度肾上腺素环境下，雌激素激活心肌细胞的Gs-AC-cAMP-PKA蛋白信号通路，从而减弱了的Gi-PI3K-PKB蛋白信号通路过度激活导致的心肌收缩抑制，减轻心肌细胞的损伤，减少TCM的发生。即，雌激素可能通过平衡Gi/Gs蛋白信号通路减少TCM的发生。
心肌病;雌激素;保护作用;Gi/Gs蛋白信号通路
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
内科学(心血管病)
孙红;李东野
2013
中文
R542.2
60
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）