大麻二酚对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用及其对IL-8、IL-10、IL-10R的影响
目的：检测大麻二酚(CBD)对人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的抑制作用及CBD对HaCaT细胞IL-8、IL-10、IL-10R产生的影响，探讨其可能的机制，为CBD临床治疗炎症性皮肤病（如银屑病、扁平苔藓）提供实验和理论依据。 方法：以人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞为模型。采用CCK-8法检测0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L CBD作用于HaCaT细胞24h、48h、72h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察各实验组细胞的形态学变化;流式细胞术检测CBD对HaCaT细胞细胞周期的影响;半定量-逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测定不同浓度CBD对HaCaT细胞IL-8、IL-10 mRNA表达的影响;Western blot方法测定不同浓度CBD对HaCaT细胞IL-10和IL-10R产生的影响。 结果：1.CCK-8比色法结果表明:在相同的作用时间段，不同浓度的CBD均能抑制HaCaT细胞增殖，与对照组相比，差异具有统计学意义(P＜0.05)。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT细胞48h，对细胞体外增殖的抑制率达到最佳，分别为8.49％、13.69％、20.67％、26.33％，CBD对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用与CBD浓度呈显著剂量依赖关系(r=0.960，P＜0.05)。2.倒置显微镜下观察发现:对照组的细胞排列紧密，有光泽，呈铺路石样;随着CBD浓度的增加，实验组细胞数目逐渐减少，细胞形态发生改变，逐渐变狭长，且折光度下降。3.流式细胞术检测结果显示:0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/LCBD组G0～G1期比例分别为(47.09±0.11)％、(49.82±0.22)％、(52.79±0.42)％、(56.87±0.10)％，S期比例分别为(48.10±0.05)％、(44.47±0.10)％、(41.32±0.11)％、(35.13±0.15)％，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05）;随着CBD浓度的增加，HaCaT细胞G0～G1期细胞比例逐渐增加(r=0.985，P＜0.05)，S期细胞比例则逐渐减少(r=-0.955，P＜0.05)。统计分析表明HaCaT细胞周期时相的变化与CBD浓度有剂量依赖关系。4.RT-PCR检测结果表明:不同浓度的CBD对HaCaT细胞IL-8mRNA的表达均有抑制作用，对IL-10 mRNA的表达则有上调作用。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT细胞48h后，IL-8/β-actin荧光强度的比值分别为0.677±0.021、0.640±0.010、0.593±0.015、0.553±0.021;IL-10/β-actin荧光强度的比值分别为0.707±0.025、0.770±0.026、0.837±0.006、0.903±0.032，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。CBD对HaCaT细胞分泌IL-10 mRNA表达的上调作用与药物浓度呈显著剂量依赖关系(r=0.938，(P＜0.05);HaCaT细胞中IL-8与IL-10 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.965，(P＜0.05)。5.Western blot检测结果显示:不同浓度的CBD均可促进IL-10和IL-10R蛋白的表达。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT细胞48h后，IL-10/β-actin灰度值比值分别为0.287±0.018、0.373±0.022、0.476±0.055、0.607±0.058;IL-10R/β-actin灰度值比值分别为0.281±0.039、0.421±0.047、0.508±0.018、0.611±0.015，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。且随着CBD浓度的增加，IL-10(r=0.975，P＜0.05)、IL-10R(r=0.938，P＜0.05)的表达量逐渐增加，存在剂量依赖关系。 结论：1.CBD能够抑制人角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖; 2.CBD可能通过阻滞HaCaT细胞周期来抑制增殖; 3.CBD能抑制HaCaT细胞分泌IL-8，促进其分泌IL-10和IL-10R。
大麻二酚;HaCaT细胞;细胞周期;抑制作用;炎症性皮肤病
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
皮肤病与性病学
魏志平
2013
中文
R758.63
56
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）