HSF1对Dp71表达的调控研究
Dp71是抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因家族在诸多组织均有表达的一个具有多种功能的同源异构体蛋白。近年来的一系列研究表明:该蛋白在神经系统的发育，神经系统功能的维护以及神经细胞的黏附和增殖过程起着重要的作用。作为介导应激反应中热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)产生的重要转录因子，热休克因子1(heatshock factor1，HSF1)还能通过结合其他基因（如iNOS、Fas）启动子区的HSE影响其mRNA和蛋白水平表达来发挥其他生物学功能。生物信息学软件分析发现小鼠和人的Dp71启动子区含有一个热休克元件(HSE)，表明Dp71的表达可能受到HSF1的调控。本课题主要是研究HSF1对Dp71基因的表达的影响，从而探讨Dp71作为HSF1可能的下游调节产物，最终导致HSF1基因敲除小鼠产生一系列神经系统症状。 本课题主要采取以下方法:1、取野生型小鼠和HSF1敲除小鼠的大脑、肺、肝脏、肾脏、脾脏等组织，提取蛋白和mRNA做Western-blot和Real time RT-PCR，在整体动物上检测HSF1敲除对DP71在非肌肉组织中表达水平的影响;2、人肺癌A549细胞转染HSF1真核表达质粒和干扰质粒，Western-blot和Real time RT-PCR检测细胞中HSF1表达的上调或下调对DP71的mRNA和蛋白表达水平的影响;3、EMSA和双荧光素酶报告基因系统从分子水平验证HSF1与Dp71基因启动子区HSE的结合。 结果显示:(1)和野生型小鼠相比，HSF1敲除小鼠非肌肉组织中Dp71的mRNA和蛋白表达水平下降，其中脑组织和肺组织中表达有差异，其差值具有统计学意义;(2) A549细胞中转染HSF1真核表达质粒和干扰质粒明显升高和降低A549细胞Dp71的mRNA和蛋白表达水平(3) EMSA和荧光素酶报告基因证实HSF1能与Dp71基因启动子区的HSE直接结合。以上结果表明:整体动物中HSF1缺失可使Dp71在非肌肉组织中表达降低;HSF1过表达和表达抑制使得A549细胞中Dp71基础表达分别升高和降低;分子水平证实HSF1直接结合Dp71基因启动子区的HSE。
热休克因子1;Dp71基因;抗肌萎缩蛋白;调控机制;神经系统症状
中南大学
硕士
基础医学
谭斯品
2013
中文
R741.02
59
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）