miRNA-214促进胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂耐药及相关机制的研究
胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，化疗是改善进展期胃癌及胃癌术后患者生存时间及生活质量的基本治疗手段，但化疗耐药限制了化疗药物的有效使用，90％的转移性肿瘤患者治疗失败是由化疗耐药引起。有关化疗耐药的相关机制尚未完全阐明，可能与以下因素有关:ABC型膜载体蛋白表达量的升高;p53基因的突变;细胞凋亡通路受阻和DNA损伤修复系统的失调等。 顺铂是一种高效广谱的周期非特异性抗癌药物，其全称为顺式二氯二氨合铂Ⅱ(cis-dichlorodiamminoplatinumⅡ)，目前仍是胃肠道肿瘤化疗一线药物，抗肿瘤作用强，但胃癌对顺铂化疗耐药制约了顺铂的有效使用。 微小RNA(microRNA，miRNA)为一类长度是21-25nt的单链非编码蛋白RNA，研究发现，其与肿瘤耐药关系密切，并影响肿瘤的化疗效果。miRNA-214位于人的1号染色体的长臂(1q24.3)Dnm3基因内，本课题组前期研究表明miRNA-214与细胞的生长和增殖有关，并能促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。至今为止,有关miRNA-214与顺铂耐药方面的研究仅限于卵巢癌。本实验首次研究miRNA-214促进胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的耐药及相关机制。 目的:探讨miRNA-214在促进胃癌细胞SGC7901/DDP对顺铂耐药中的作用及其机制，寻找新的分子治疗靶标，指导临床用药。 方法: 1、通过荧光定量PCR检测亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901/DDP中miRNA-214的表达差异; 2、通过转染miR-214 inhibitors下调耐药细胞系SGC7901/DDP中miR-214的表达量，以无关序列转染组（NC组）作为阴性对照，同时以空白转染组（CON组）作为空白对照，转染24h后通过荧光显微镜观察瞬时转染效率; 3、检测耐药细胞系SGC7901/DDP细胞瞬时转染miRNA-214抑制剂(miRNA-214 inhibitors)后miRNA-214表达量的改变; 4、MTT检测转染miRNA-214抑制剂(miRNA-214 inhibitors)后SGC7901/DDP细胞对DDP药物敏感度的变化; 5、Western blot检测miR-214 inhibitors转染组、无关序列转染组(NC组)、空白转染组（CON组）分别转染miRNA-214抑制剂及无关序列后对靶基因PTEN蛋白表达量的影响。 结果: 1、荧光定量PCR检测miRNA-214的含量:与亲本细胞株SGC7901相比，miRNA-214在耐药细胞株SGC7901/DDP中呈显著高表达(P＜0.01)，是亲本细胞株SGC7901中表达量的2.320±0.106倍，即与亲本细胞株SGC7901相比，miRNA-214在对顺铂(DDP)耐药的人胃癌细胞株SGC7901/DDP中呈显著高表达; 2、瞬时转染24h后，于荧光显微镜下观察计数检测转染效率，miR-214 inhibitors转染人胃癌SGC7901/DDP细胞，转染效率约80％; 3、转染后SGC7901/DDP细胞中的miRNA-214含量变化:以空白转染组（control组）表达量为基准，miRNA-214 inhibitors转染组miRNA-214水平是control组的0.187±0.031倍，无关序列转染组miRNA-214水平是control组的0.869±0.025倍(P＜0.05)，即将miRNA-214的抑制片段转染到SGC7901/DDP中后miRNA-214表达量显著降低; 4、MTT试验结果显示，miRNA-214 inhibitors转染组DDP对细胞生长的抑制率明显高于阴性对照片段转染组的抑制率。miRNA-214inhibitors转染组依次加入浓度梯度为2.5、5、10、20、40、80mg/L的DDP后对细胞生长的抑制率分别是(20.67±0.50)％、(36.87±1.29)％、(56.50±0.53)％、(77.43±1.55)％、(88.93±0.65)％、(93.87±2.40)％，其IC50值为(7.766±0.109)mg/L;阴性对照片段转染组对应上述药物浓度的DDP对细胞生长的抑制率分别为(16.97±0.95)％、(31.07±0.59)％、(47.87±1.16)％、(58.37±1.40)％、(79.50±1.87)％、(90.37±0.55)％，其IC50值为(15.310±1.640)mg/L。DDP对miRNA-214 inhibitors转染组的IC50值明显低于转染阴性对照片段组(P＜0.05)，分析发现转染后DDP对细胞生长的抑制率明显提高，对细胞的半数抑制浓度(IC50)明显降低; 5、Western blot检测miRNA-214 inhibitors转染组，阴性片段转染组和空白对照组PTEN蛋白的表达水平，表达结果经灰度测量定量分析，转染miRNA-214 inhibitors的实验组PTEN蛋白表达水平显著高于空白对照组，上调倍数为（1.80±0.02）(P＜0.05)。 结论: 1、miRNA-214在SGC7901/DDP细胞对DDP耐药中发挥着一定的作用，下调miRNA-214可能逆转SGC7901/DDP细胞对DDP耐药; 2、调节PTEN蛋白的表达可能是miRNA-214参与SGC7901/DDP细胞对DDP耐药的机制之一。
miRNA-214;胃癌;SGC7901/DDP细胞;顺铂;耐药机制;分子靶标
中南大学
硕士
基础医学
郑长黎
2013
中文
R735.2;R730.53
57
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）