莲子心中总黄酮、多糖的分离纯化及氨基酸、农残测定研究
莲子心(Plumula Nelumubinis)为睡莲科植物莲(Nelumbo nuciferaGaertn.)的成熟种子的干燥幼叶及胚根，含有生物碱，黄酮，多糖，氨基酸等主要成分。目前对莲子心中生物碱的研究较为多见，对其中所含的黄酮，多糖，氨基酸类物质研究较少。为了提高莲子心药材的利用率，本论文拟对莲子心中总黄酮、多糖类物质的分离纯化及氨基酸、农残测定进行研究，主要内容如下: 1.莲子心总黄酮回流提取工艺优选 以总黄酮提取量及浸膏得率为指标，在单因素实验基础上，采用正交试验设计考察乙醇浓度、提取时间、料液比对提取效果的影响。最佳提取工艺为:采用20倍量70％乙醇提取2次，第一次1.5 h，第二次1h。 2.莲子心总黄酮纯化工艺优选 以树脂对莲子心总黄酮的吸附量和解吸率为指标，首先考察了ME-2、OU-2、DM130等10种树脂;然后采用静态与动态相结合的方法，确定了DM130树脂最佳纯化莲子心总黄酮的工艺参数。即，样液质量浓度是0.4g·mL-1，溶液pH3～4;解吸剂为70％的乙醇，洗脱体积为上样液3BV;洗脱流速为1mL·min-1。采用该工艺纯化后，能得到质量分数＞42％莲子心总黄酮。 3.莲子心中多糖的测定和纯化 首先，依次采用水提取，木瓜蛋白酶除蛋白、浓缩、醇沉、真空干燥获得莲子心粗多糖。然后，利用DEAE-32纤维素和SephadexG-100进行分离，先后用蒸馏水、不同浓度的NaCl洗脱作洗脱曲线，合并对称峰得到7个多糖。 4.莲子心中氨基酸含量测定的研究 建立气质联用法分析莲子心中的氨基酸的方法。莲子心采用水(1∶35)、6mol·L-1盐酸(1∶25)高温回流提取，提取液经BSTFA+1％TMCS衍生后进样，采用全扫描(Scan)定性，选择离子监测(SIM)内标法定量。色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25μm×0.25 mm)，初始柱温为100℃，保持3min，程序升温8℃·min-1至300℃，保持6min，分流比为10∶1。结果:测得水解氨基酸15种，游离氨基酸13种，总含量分别为7.14％和0.13％。样品的平均回收率(n=5)在85.7％～109.2％之间;RSD在0.77％～4.85％之间。该方法处理过程简单、简便易行，准确快速。 5.莲子心中有机氯农药残留的GC-MS分析 样品经C18净化和硫酸磺化处理后用GC-MS分析。采用选择离子监测模式(selected ion monitoring，SIM)，以保留时间和特征离子定性、外标法定量。色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25μm×0.25 mm)，程序升温（初始柱温为80℃，保持1min，程序升温30℃·min-1至175℃，保持4min，6℃·min-1至200℃，保持5 min，30℃·min-1至300℃），分流比为1∶1。 结果:23种农药在相应范围内线性良好（r均在0.999以上），平均回收率(n=5)在87.9％～105.3％之间;RSD均在6％以下。采用该法对5个不同产地的莲子心中进行分析，未检测到农药残留。
莲子心;黄酮;多糖;氨基酸;农残测定;回流提取工艺;纯化工艺
中南大学
硕士
药剂学
刘韶
2013
中文
R284
87
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）