HepaCAM对膀胱移行细胞癌基因表达谱的影响及hepaCAM通过AMPK/mTOR通路抑制膀胱癌细胞增殖
第一部分、HepaCAM对膀胱移行癌细胞株基因表达谱的影响 目的:利用Affymetrix基因表达谱芯片研究hepaCAM对膀胱移行癌细胞株基因表达谱的影响。探讨hepaCAM对膀胱癌细胞作用的分子机制。 方法:运用Affymetrix Human plus2.0全基因组芯片检测膀胱移行癌细胞株EJ细胞Ad-GFP-hepaCAM组与Ad-GFP组的基因表达谱，用SAM法进行差异基因分析、DAVID软件进行GO分析及wikiPathway分析，并用RT-PCR和western blot验证芯片结果。 结果:HepaCAM能引起EJ细胞系基因表达谱广泛的变化，表达差异超过2倍以上的基因共2469个，其中上调基因1602个，下调基因867个。这些差异表达的基因功能主要涉及细胞周期、细胞增殖调节等方面。用RT-PCR对上调基因LKB1和下调基因NBN和cyclinD1进行验证，结果与基因芯片相符;进一步在BIU-87、T24和EJ细胞株中用western blot佐证NBN、LKB1变化与芯片结果一致。 结论:HepaCAM能够诱导EJ细胞基因表达谱广泛的变化，通过多条通路在基因水平上作用于膀胱癌细胞。 第二部分、HepaCAM与p-mTOR在膀胱移形细胞癌组织中蛋白表达的相关性 目的:研究肝细胞粘附分子(hepaCAM)与磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)在膀胱移形细胞癌组织中蛋白表达的相关性。 方法:应用western blot检测25例男性和5例女性膀胱移形细胞癌组织与癌旁组织中hepaCAM与p-mTOR的蛋白表达水平。癌组织的病理参数情况为:Ta-T1期7例，T2-T4期23例;G1期13例，G2期9例，G3期8例;初发13例，复发17例。 结果:Western blot结果显示，膀胱移行细胞癌癌组织中hepaCAM的蛋白水平明显低于癌旁组织(p＜0.001)，而p-mTOR的蛋白水平明显高于癌旁组织(P＜0.001)。Spearman相关分析显示hepaCAM与p-mTOR的蛋白表达呈负相关（r=-0.533，P=0.002），而hepaCAM与p-mTOR的蛋白表达与膀胱癌各临床病理参数间均无相关性。 结论:膀胱移形细胞癌中hepaCAM的低表达与p-mTOR的高表达密切相关，为进一步探讨hepaCAM抑制膀胱癌增殖的机制奠定了一定的基础。 第三部分、HepaCAM通过AMPK/mTOR信号通路抑制膀胱移形癌细胞的增殖 目的:体外研究hepaCAM抑制膀胱移形细胞癌增殖的分子机制。 方法:应用WST-8试验检测hepaCAM对膀胱移形细胞癌T24、BIU-87和EJ细胞株增殖的影响。应用Western blot检测磷酸化AMPK、总AMPK、磷酸化mTOR、总mTOR、c-Myc和cyclin D1蛋白水平的表达。 结果:HepaCAM能够抑制膀胱移形细胞癌细胞株T24、BIU-87和EJ细胞的增殖。体外过表达hepaCAM能够增加AMPK的磷酸化、降低mTOR的磷酸化及c-Myc和cyclin D1的蛋白表达。加入AMPK抑制剂Compound C能够减少hepaCAM抑制增殖的效果，并能降低AMPK的磷酸化，增加mTOR的磷酸化及c-Myc和cyclin D1的蛋白表达水平。 结论:HepaCAM能够通过AMPK/mTOR通路抑制膀胱移形癌细胞的增殖。
膀胱移行细胞癌;HepaCAM;mTOR磷酸化;基因表达谱;细胞增殖
重庆医科大学
硕士
临床检验诊断学
罗春丽
2013
中文
R737.14;R730.23
67
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）