溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒的制备及其对兔角膜新生血管的影响
目的：制备一种新型纳米级眼药—溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒，初步研究该药的体外缓释性能、眼表毒性及对角膜新生血管影响，探讨其作用机制，为临床上治疗角膜新生血管提供新思路。 本实验分为三部分: 实验一:溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒的制备及其体外释药实验；实验二:溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒的兔眼表毒性实验；实验三:溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒对兔角膜新生血管的影响 方法： 实验一:用离子胶联法制备溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒(BF/CSnanoparticles)，观察其表征（粒径，Zeta电位，包封率和载药量等）及体外释药性能。 实验二:按照实验一的方法制备溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒混悬液。5只雌性新西兰大白兔被用于实验，每30分钟滴浓度为0.1％的溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒混悬液到实验眼（右眼），同时给予对照眼（左眼）相同剂量生理盐水，持续6小时。之后在特定的时间点分别对实验眼和对照眼的眼部症状进行评分，评分标准采用:1987年经济合作与发展组织(Organization for Economic Cooperation and Development, OECD)制定的眼表刺激性实验评分系统。评分后处死实验兔，并取下兔的角膜、结膜及眼睑组织分别作组织病理学检测，观察两组各组织的形态学表现有无差异。 实验三:利用NaOH建立兔角膜碱烧伤模型。60只新西兰大白兔被随机分为生理盐水对照组（A组）、0.1％溴芬酸钠水溶液治疗组（B组）、0.1％溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒混悬液治疗（C组），每组20只。术后7d、14d、21d、28d分别测量各组的角膜新生血管面积，并取角膜组织行HE染色和荧光定量PCR检测，比较各组角膜组织中COX-2和VEGF的表达。 结果： 实验一:制备的溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒呈球形，表面光滑，大小均一。根据不同浓度的溴芬酸钠所制备的纳米粒平均粒径分布在362.0±14.7～548.7±14.4 nm之间，Zeta电位分布在22.9±4.3～43.2±4.7mV之间，载药量和包封率的范围分别为11.26-57.71％和22.48-67.11％。体外释药实验中，溴芬酸钠的释放初期存在突释现象，之后的释放则相对缓慢，且释药时间可达48h。 实验二:根据评分系统，实验组评分为1，对照组评分为0。实验组和对照组的角膜、结膜及眼睑组织，均未见任何细胞结构上的差异，均未见组织细胞水肿及任何异常炎性细胞的浸润。 实验三:碱烧伤能够诱导角膜的炎症反应和角膜新生血管的形成。同BF水溶液治疗组和对照组比较，BF/CS纳米粒能延缓角膜新生血管的出现时间，减少新生血管面积(P＜0.05)，能抑制碱烧伤后不同时间点角膜组织的炎症反应，还能下调角膜组织中COX-2和VEGF基因mRNA的表达(P＜0.05)。 结论 1.用离子胶联法能成功制备溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒，该方法简便、易于操作、可重复性强;制备的溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒物理化学性状稳定，在体外具有良好的缓释作用。 2.溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒混悬液不引起兔眼表的炎症反应和组织结构改变，对兔眼表无急性毒性。 3.溴芬酸钠/壳聚糖纳米粒混悬液能抑制兔角膜新生血管的生长，同时下调碱烧伤后角膜组织中COX-2和VEGF基因mRNA的表达。
壳聚糖;溴芬酸钠;纳米粒眼药;缓释性能;角膜新生血管
重庆医科大学
硕士
眼科学
赵敏
2013
中文
R772.2;R988.1
52
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）