具有H274Y突变的2009大流行H1N1协同耐药突变株生物学特性研究
第一部分神经氨酸酶表面展示方法的建立
目的：建立有效的甲流病毒神经氨酸酶表面展示方法。
方法：利用真核表达、活病毒感染、酵母展示系统获得表面展示的NA，用荧光发光法检测神经氨酸酶(NA)酶学特性，采用流式细胞仪检测其与候选抗体3种抗体的亲和力。
结果：真核表达、酵母展示系统均可以使神经氨酸酶在表面展示，且具有与活病毒NA相似的特性。在候选的3种抗体中，真核表达以及病毒的NA可1、3号抗体结合，病毒的NA还能与3号抗体结合;而酵母展示系统的NA与3种抗体均不能结合。
结论：活病毒感染系统适合用于NA表面展示，抗体1和3均可用于检测NA表面表达。
第二部分具有H274Y突变的2009大流行H1N1协同耐药突变株生物学特性初步研究
目的：研究具有H274Y突变2009大流行H1N1协同耐药突变株病毒繁殖能力、NA酶学特性。
方法：采用反向遗传学和定点突变获得A/California/04/2009(CA04)野生型以及7个突变毒株(H274Y，I222R，I222T，I222K，I222R+H274Y,I222K+H274Y，I222T+H274Y)。用荧光发光法检测NA性能，流式细胞仪检测NA表面展示，通过生长曲线测定了解病毒的繁殖能力。
结果：与野生型相比，I222T单突变对奥司他韦的敏感性下降，但并不影响病毒的生长以及NA表面展示和酶活。I222K/R突变对两种神经氨酸酶抑制剂敏感性下降，但是病毒的生长力也降低。I222K/R突变与H274Y对奥司他韦、扎那米韦都有协同耐药作用，且突变株生长力降低明显，NA表面展示和酶活也降低;而I222T+H274Y突变仅对奥司他韦有协同耐药作用，病毒生长力和NA表面展示以及酶活并没受影响。
结论：2009大流行H1N1的I222R/K/T突变与H274Y有协同耐药，且影响病毒的生物学特性。
流感病毒;神经氨酸酶抑制剂;耐药突变株;生物学特性;H274Y突变
重庆医科大学
硕士
儿科学
韦红
2013
中文
R373.13
54
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）