甜高粱蔗糖合成酶基因的克隆及转EPSPS基因研究
甜高粱既能收获粮食，又能获得含糖茎秆，且其耐旱、耐盐碱不与粮食作物争地的特点使其成为中国生物质能源的良好选择。但其作为生物质能源仍存在一些亟待解决的问题:茎秆含糖量不高，对除草剂敏感不利于降低生产成本等，对光敏感不利于其两季种植的高产等。本实验基于以上目的进行了3部分实验:1.克隆甜高粱北甜三号的蔗糖合成酶基因及其前端调控序列;2.建立北甜三号再生转化体系;3.转抗除草剂基因EPSPS。主要结论如下:
1.北甜三号蔗糖合成酶序列与分析。经序列分析可知:此序列共计5992bp，起始密码子至终止密码子共4483bp，共编码802个氨基酸。经由比对后发现该序列与NCBI上已登录甜高粱品种AFRICA WHITE的蔗糖合成酶编码序列相似度达97％，说明了蔗糖合成酶基因具有保守性;
2.北甜三号再生转化体系。不同基因型的甜高粱品种，其诱导胚性愈伤组织与分化的配方也大相径庭。经实验与后期数据分析可知，北甜三号最佳诱导胚性愈伤组织培养基为:MS+2.5mg/L2，4-D+0.1mg/LTDZ;最佳诱导分化培养基为:MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA;
3.转抗除草剂基因EPSPS。经实验发现如果农杆菌浸染时间过长，在后期共培养过程中会大量出现胚性愈伤组织褐化死掉现象;侵染时间如果过短，在后期筛选胚性愈伤组织时会发现大量假阳性。在浸染晃荡过程中，较易松散的颗粒状胚性愈伤组织在后期共培养过程中更容易存活;得出最佳共培养时间为60小时，且筛选过程中较适宜的抗生素浓度第1周为50ug/ml卡纳霉素、75mg/ml潮霉素和500mg/L羧苄青霉素，第2周为50ug/ml卡纳霉素、37.5mg/ml潮霉素和250mg/L羧苄青霉素。
甜高梁;蔗糖合成酶;再生转化体系;基因克隆
广西大学
硕士
作物遗传育种
冯斗
2013
中文
S566.501
54
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）