OsMADS59、OsDDL基因的水稻转化及OsMADS59在OsTFL2 RNAi转基因水稻中的表达分析
植物的生长发育过程受到众多基因的调控作用的影响。在拟南芥开花调控网络中，开花抑制基因FLC处于枢纽地位。FLC属于MADS盒基因。在水稻基因组中，和拟南芥FLC同源性最高的是OsMADS59。鉴于生物进化的保守性和拟南芥FLC基因的重要功能，研究OsMADS59在水稻中的功能及它与其它开花调控基因的关系，具有重要意义。本研究利用农杆菌介导法，将OsMADS59过表达和RNAi载体转化入水稻植株，为研究OsMADS59的生物学功能提供材料。同时利用原位杂交方法，研究OsMADS59在OsTFL2 RNAi转基因水稻中的表达，旨在研究OsMADS59与OsTFL2之间的调控关系。此外，本研究还构建了一个新基因OsDDL的RNAi载体，该基因可能参与水稻的开花调控，获得OsDDL RNAi转基因水稻植株，为最终探明其生物学功能奠定了基础。本研究的主要结果如下:
1、获得OsMADS59过表达和OsMADS59 RNAi转基因水稻植株。本试验采用农杆菌介导的方法，通过对水稻农垦58进行胚的愈伤组织的诱导，用经过OsMADS59过表达载体和RNAi载体转化的EHA105农杆菌对愈伤组织材料进行侵染，在500mg/L的潮霉素浓度下，对抗性愈伤组织进行筛选，OsMADS59过表达愈伤组织分化出15株抗性植株，经PCR检测，最终获得转基因阳性植株共13株;OsMADS59 RNAi愈伤组织分化出33株抗性植株，经PCR检测，最终获得转基因阳性植株共22株。
2、本研究中，以TFL2RNAi转基因水稻农垦58(58N TRI)作为试验材料，以水稻农垦58作为对照(58N CK)，分别在水稻生长至第27天和第54天时，取叶片和茎尖为材料，进行RNA原位杂交试验，研究结果表明:随着水稻生长时间的延长，58N CK的叶片和茎尖分生组织中OsMADS59的表达量明显增加;而在58N TRI的叶片和茎尖分生组织中，OsMADS59的表达量明显降低。
3、成功构建OsDDL的RNAi载体。从水稻日本晴的基因组DNA中扩增出OsDDL的RNAi片段，经过在pUCm-T载体上的克隆，将RNAi片段在176载体上反向连接，从而完成RNA干扰结构的构建，最后将RNA干扰结构连接于pICAMBIA1300上，经序列测定，比对结果完全正确，从而完成了OsDDLRNAi载体的构建。
4、用经过OsDDL RNAi载体转化的EHA105农杆菌对愈伤组织材料进行侵染，从愈伤组织中分化出14株潮霉素抗性植株，经PCR检测，最终获得转基因阳性植株共11株。
转基因水稻;基因转化;原位杂交;农杆菌介导法;生物学功能
广西大学
硕士
作物遗传育种
刘芳
2013
中文
S511.035.3
66
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）