枯草芽孢杆菌菌株Bv10胞外抗菌物质的纯化及其特性测定
本研究以芝麻白绢病菌(Athelia rolfsii)为指示菌，对枯草芽孢杆菌菌株Bv10的发酵条件、抗菌物质的纯化、胞外抗菌物质的理化性质、抗菌物质的部分作用机制及其毒力和盆栽防效进行了研究。取得的主要研究结果如下:
1、最适培养菌株Bv10的条件为:温度30℃、初始pH值为8.0、接种量为3％、装液量为100 mL/250 mL的三角瓶、转速为170 rpm、最佳培养时间是5d。
菌株Bv10生长和高产抗菌物质的培养基配方(w/v)为:麦芽糖3.0％，NH4Cl0.5％，牛肉浸膏0.5％，K2HPO43.0％，MgSO4·7H2O0.5％。
2、该抗菌粗提取物对热稳定，但121℃高压下，随着处理时间的延长，热稳定稍下降。在pH7～9的范围内，菌株Bv10产生的抗菌物质的抑菌活性较稳定。抗菌物质置于日光灯和自然光下照射1～5 d，活性没有改变。胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、果胶酶对该抗菌物的抗菌活性也没有影响。此外，菌株Bv10产生的抗菌粗提物能溶于磷酸缓冲液、甲醇、水，不溶于丙酮、乙腈、二氯甲烷。
菌株Bv10产生的抗菌粗提取物对14种植物病原真菌[向日葵细交链格孢菌Alternaria alternata、污斑拟盘多毛孢Pestalotiopsis foedans、苹果轮纹病菌Botryosphaeria berengerianaf.sp.piricola、粉红聚端孢菌Trichothecium roseum、瓜果腐霉Pythium aphanidermatum、香蕉褐缘灰斑病菌Pseudocercospora musae、山茱萸叶枯病菌Botryosphaeria dothidea、莴苣灰霉病菌Botryotinia fuckeliana、芝麻白绢病菌Athelia rolfsii、玉米穗腐病菌（Gibberellazeae、Fusarium equiseti、G.moniliformis、F.proliferatum）、大叶黄杨炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides]和两种非植物病原真菌（毛壳霉Chactomium globosum、脉永孢菌Gelasinospora brevispora）的生长有较好的抑制作用，对终极腐霉Pythium ultimum和芝麻疫病菌Phytophthora sp.无抑制作用。对5种病原细菌（水稻细菌性条斑病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzicola、水稻白叶枯病菌X.oryzae pv.oryzae、辣椒青枯病菌Ralstonia solanacearum、柑橘溃疡病菌Xanthomomas campestris pv.cirri和番茄细菌性斑点病菌Pseudomonas syringae pv.tomato）有抑制作用，对胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacterium carotovora没有作用。
3、经盐酸沉淀、甲醇萃取以及反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法，从菌株Bv10的无菌发酵液中提取和纯化到A和B两种对芝麻白绢病菌具有较强抑制作用的活性物质，其分子量分别为1042 Da和1057 Da。MALDI-TOF-MS/MS CID质谱分析两种纯化物的分子的一级结构均为Pro-Asn-Ser-βAA-Asn-Tyr-Asn-Gln，将纯化物A鉴定为脂肽化合物伊枯草菌素iturinA2，将纯化物B鉴定为iturin A4。
4、纯化物A和B浓度都为200 mg·L-1时可以完全抑制芝麻白绢病菌菌核的萌发，当纯化物的浓度为100 mg·L-1和50 mg·L-1时，纯化物A对菌核萌发的抑制率分别为82.22％和73.33％，纯化物B对菌核萌发的抑制率分别为77.78％和68.89％。显微镜下观察到受抑制的菌丝体扭曲变形，生长紊乱，分隔处缢缩，甚至在分枝处断裂，菌丝顶端膨大，原生质体凝聚，顶端成囊泡状。
5、纯化抗菌物质A和B对芝麻白绢病菌的抑菌中浓度EC50值分别为36.7866mg·L-1和43.0329 mg·L-1。
在盆栽防治试验中，先施药后接种的处理区中，菌株Bv10粗提物(1×105 mg·L-1)和无菌发酵液对芝麻白绢病的防治效果分别为77.42％和39.82％;先接种后施药的处理区中，菌株Bv10粗提物(1×105 mg·L-1)和无菌发酵液对芝麻白绢病的防治效果分别为68.69％和30.30％。
枯草芽孢杆菌;芝麻;白绢病菌;抗菌物质;发酵优化;纯化鉴定;防治效果
广西大学
硕士
农药学
黎起秦;黄思良
2013
中文
S482.291;S435.653
81
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）