人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型的神经保护作用及其机制研究
目的:探讨人参皂苷Rg1(G-Rg1)对大鼠脑缺血再灌注(CIR)损伤模型的神经保护作用及对缺血再灌注后脑组织水通道蛋白4(aquporin4)和蛋白酶激活受体-1（PAR-1）表达变化的影响。
方法:300只SD大鼠，雄性，随机分为5组:假手术组(n=60); CIR组(n=60);G-Rg1组20mg/kg组(n=60);乙酰唑胺(AZA)组100mg/kg组(n=60);G-Rg1组20mg/kg+AZA组100mg/kg组(n=60)。每组据不同时间点分为6h、1d、3d、7d、14d5个亚组(n=12)。各组均于术前三天开始腹腔注射给药，每天1次。G-Rg1与AZA分别以生理盐水及注射用大豆油做对照。本实验采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型，假手术组只分离血管不插入线栓。于术后2h采用Zea Longa评分标准筛选成功模型，1～3分视为造模成功，并于术后各时间点评价大鼠神经功能缺损的变化;测定伊文思蓝(Evans Blue，EB)含量来观察血脑屏障(BBB)通透性;蛋白免疫印迹法(Western blot，WB)检测病灶侧海马区AQP4和PAR-1蛋白表达，荧光定量RT-PCR技术检测病灶侧纹状体AQP4 mRNA和PAR-1mRNA的表达。
结果:
1.神经功能评分比较:模型组与各药物组大鼠在脑缺血再灌注后6h时比较，神经功能评分无显著性差异(P＞0.05)。在6h后模型组与各药物组大鼠神经功能评分呈相同的变化趋势，第3d神经功能评分最高，随后开始降低，各时间点比较具有统计学差异(P＜0.05)。G-Rg1组与模型组比较在再灌注后1d、3d比较有统计学意义(P＜0.05); AZA组与模型组在术后第1d、3d、7d、14d点比较均有统计学意义(P＜0.05); G-Rg1+AZA联合治疗组与模型组、G-Rg1组和AZA组比较在再灌注后1d、3d、7d、14d时间点均有统计学意义(P＜0.05)。而G-Rg1组与AZA组比较无明显统计学意义(P＞0.05)。
2.伊文思蓝测定:模型组在再灌注后6h即有EB漏出进入脑组织中，在第3天漏出量达到高峰，随后开始下降，组内各时间点比较具有统计学差异(P＜0.05)。模型组与假手术组、G-Rg1组，AZA组、G-Rg1+AZA联合治疗组在再灌注后各时间点均存在统计学差异(P＜0.05)。G-Rg1+AZA联合治疗组与G-Rg1组和AZA组比较在再灌注后各时间点均有统计学意义(P＜0.05)。而G-Rg1组与AZA组比较无明显统计学意义(P＞0.05)。
3.AQP4表达的变化:荧光定量RT-PCR技术和蛋白免疫印迹法检测发现模型组在缺血再灌注后6h即可见AQP4表达升高，在第3d处于最高值，随后开始下降，各时间点比较具有统计学差异(P＜0.05)。模型组与假手术组、G-Rg1组，AZA组，G-Rg1+AZA联合治疗组在再灌注后各时间点均存在统计学差异(P＜0.05)。G-Rg1+AZA联合治疗组与G-Rg1组和AZA组比较在再灌注后各时间点均有统计学意义(P＜0.05)。而G-Rg1组与AZA组比较无明显统计学意义(P＞0.05)。
4.PAR-1表达的变化:荧光定量RT-PCR技术和蛋白免疫印迹法检测显示模型组PAR-1表达在6h无明显变化，在6h后开始上升，7天处于最大值，随后表达减少，各时间点比较具有统计学差异(P＜0.05)。模型组与假手术组、G-Rg1组和G-Rg1+AZA联合治疗组比较在再灌注后除6h外各时间点均有显著性差异(P＜0.05)，而与AZA组比较无统计学意义(P＞0.05)。AZA组与G-Rg1组和G-Rg1+AZA组比较均有统计学意义。G-Rg1组与G-Rg1+AZA组比较无明显差异(P＞0.05)。
结论:
1.大鼠脑缺血再灌注损伤后AQP4与PAR-1的表达升高，并与BBB通透性增加相关，均可加重缺血性脑水肿的发生与发展。
2.人参皂苷Rg1对大鼠缺血再灌注急性期有神经保护作用，可降低BBB通透性，其保护机制可能是通过下调AQP4与PAR-1表达实现的。
脑缺血再灌注;人参皂苷Rg1;血脑屏障;水通道蛋白表达;蛋白酶激活受体-1;神经保护
温州医科大学;温州医学院
硕士
神经病学
郑国庆
2013
中文
R743.31;R284.1
50
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）