SERPINA3K对翼状胬肉原代细胞的增殖迁移能力的抑制作用及机制研究
目的：氧化应激为眼表常见病翼状胬肉的主要发病机制之一。最近研究表明，Wnt信号通路也跟翼状胬肉的发病有密切关系。本课题主要研究SERPINA3K对胬肉原代细胞的增值和迁移的抑制作用，探究其作用机制，为临床上胬肉疾病的治疗提供新的理论依据。
方法：将新鲜的翼状胬肉组织块在显微镜下分离，分成上皮部分和基质部分。采用组织块方法分别培养，待培养出的胬肉上皮细胞和胬肉成纤维细胞长到80％时，传代并分组，分为SERPINA3K处理组（加SERPINA3K组）和不处理组（对照组）。采用CCK8法来检测胬肉原代细胞的增殖情况;采用划痕实验来检测胬肉原代细胞的迁移情况;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(quantitativeReal-timeRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(WesternBlot)和免疫荧光染色(immunofluorescentstaining)等实验方法，检测与氧化应激相关的因子如NOX4、SOD2、NRF2、NQO1、catalase和GSTP的变化情况以及Wnt信号通路相关因子的基因表达水平以及蛋白水平如n-p-β-catenin、β-eatenin、LRP6。
结果：与正常结膜相比，3-NT、NOX4在翼状胬肉中表达量显著下降，提示胬肉处于氧化应激状态。用组织块培养方法成功培养出胬肉上皮细胞和胬肉成纤维细胞。培养出的细胞传代，加SERPINA3K处理。从CCK8和划痕实验可以观察到，SERPINA3K能抑制胬肉原代细胞的增殖和迁移，并且在胬肉上皮细胞中表现更为明显，胬肉上皮细胞的增殖标志物Ki67表达量下降。在胬肉两种不同细胞中，其作用机制不完全相同。在胬肉上皮细胞中，SERPINA3K明显降低与活性氧物质(ROS)生成相关因子NOX4的水平和与Wnt信号通路相关因子n-p-β-catenin、β-catenin、LRP6的水平，而使抗氧化因子SOD2、NRF2和NQO1水平升高。SERPINA3K也使胬肉成纤维细胞中NOX4、β-catenin水平下降，而抗氧化因子SOD2、NRF2、catalase和GSTP水平明显升高，而与Wnt信号通路相关因子n-p-β-catenin、LRP6的表达水平不稳定。
结论：SERPINA3K显著抑制胬肉原代细胞的增殖和迁移能力。SERPINA3K对胬肉原代细胞的作用机制可能有以下两方面:一方面SERPINA3K抑制胬肉原代细胞中Wnt信号通路的激活;另一方面SERPINA3K通过调节活性氧物质(ROS)系统，即抑制ROS的生成和促进ROS的降解。本实验首次研究了SERPINA3K对翼状胬肉的作用，为探索新型治疗翼状胬肉的药物提供了有益的尝试以及实验依据。
胬肉原代细胞;wnt信号通路;氧化应激;增殖迁移能力
厦门大学
硕士
药理学
马建兴;周跃平
2013
中文
R965
65
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）