Hsp90小分子抑制剂B3的发现及与Hsp90相互作用的初步研究
热休克蛋白90(Heatshockprotein90，Hsp90)是热休克蛋白家族的重要一员。研究发现Hsp90的很多客户蛋白在肿瘤的发生与发展过程中具有重要的作用，Hsp90因此成为重要的抗肿瘤靶点之一。其抑制剂格尔德霉素(Geldanamycin，GA)的衍生物等二十多种化合物作为抗肿瘤药物已经进入临床实验，并展示出良好的应用前景。Hsp90抑制剂已成为抗肿瘤药物及其先导化合物的重要来源。
本论文以Hsp90为靶点，利用体外相互作用、分子对接和Hsp90的ATPase活性分析等方法，对来自海洋微生物和植物内生真菌等306个结构新颖、独特的天然化合物进行筛选，从中发现了与GA结构完全不同，但对Hsp90的ATPase活性抑制作用与GA相当的新结构类型的抑制剂B3，并初步确立了B3与Hsp90的结合方式及结合位点。同时也对其它有潜力的化合物的结合机制等进行了分析，取得了一些有意义的结果。
通过体外相互作用分析从306个化合物中筛选到26个与Hsp90有较强相互作用的化合物。在此基础上，检测了26个化合物对Hsp90ATPase活性的抑制作用，结果发现有10个化合物对Hsp90的ATPase活性有较强的抑制作用，其中B3对Hsp90ATPase的IC50仅为0.38μmol/L，接近GA的IC50（0.29μmol/L）。酶动力学实验结果表明，B3是Hsp90的非竞争型抑制剂。
我们通过荧光滴定法和FortebioOctetRed方法研究了B3与Hsp90全长及其截短的N-Hsp90、C-Hsp90间的相互作用，以期确定其结合位点。结果表明B3与全长和N-Hsp90、C-Hsp90间存在着相互作用，但与N-Hsp90的结合强于C-Hsp90。
结合分子模拟结果，通过构建Hsp90靠近N端的点突变蛋白质，考察B3与Hsp90点突变蛋白质间的相互作用，结果发现Hsp90N-末端的K58，D93和T184三个残基可能是B3与Hsp90N-末端的结合位点。
此外，本论文也对具有较强抗肿瘤活性且对Hsp90ATPase活性具有一定抑制作用的结构新颖的化合物DAM的抑制类型及作用机制进行了分析。初步确定了其为Hsp90的非竞争性抑制剂，其抑制Hsp90的IC50约为380μmol/L。
本论文筛选到结构新颖的Hsp90非竞争型抑制剂B3，并且确定了其与Hsp90N-末端的结合位点。同时本论文还对其它几个Hsp90抑制剂的抑制类型开展了不同程度的研究。本研究结果旨在为后续将其作为抗肿瘤药物的研究开发奠定基础。
热休克蛋白90;小分子抑制剂;抗肿瘤靶点;结合机制
厦门大学
硕士
微生物学
张连茹
2013
中文
R979.1
110
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）