天麻酚性成分对PC12细胞及胎鼠皮层神经元OGD/R损伤保护作用的研究
目的：采用PC12细胞缺糖缺氧/复糖复氧（oxygen-glucose deprivation and reintroduction，OGD/R）损伤模型对从天麻中分离的15个酚性成分进行活性筛选，再将具有活性的成分作用于胎鼠皮层神经元OGD/R损伤模型进行确证，并探讨可能的作用机制。
方法：⑴采用含Na2S2O4的无糖Earle's液造成PC12细胞缺糖缺氧，然后换正常培养基复糖复氧，以细胞形态变化和细胞存活率（MTT法）作为评价指标，筛选出天麻15个酚性成分中能够提高细胞存活率的活性成分。⑵取妊娠18～19天大鼠的胎鼠，采用神经细胞原代分离技术，获取胎鼠皮层神经元，复制OGD/R模型，于倒置显微镜下观察活性成分对OGD/R损伤皮层神经元形态结构的影响。采用MTT法检测活性成分对OGD/R损伤皮层神经元存活率的影响。⑶用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测神经元内外LDH的活性，计算LDH漏出率，评价活性成分对模型神经元细胞膜的影响。⑷采用Fura-2/AM荧光探针检测神经细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的变化，探讨活性成分是否具有抗神经细胞内钙超载的作用。
结果：①天麻各酚性成分对PC12细胞OGD/R损伤模型表现出不同的作用。部分酚性成分能够不同程度减轻模型细胞的形态结构受损;通过MTT法对细胞相对活性的检测显示，能提高模型细胞活性的成分为:1#、3#、4#、8#、11#、13#，具有抑制作用的成分为:2#、5#、6#、9#;低剂量能提高而高剂量能抑制细胞活性的成分为:7#、12#、14#;对细胞活性既无提高也无抑制作用的成分为:10#、15#。②皮层神经元在OGD/R损伤后，胞体折光度下降，突触回缩甚至断裂，最终细胞圆缩，脱落，模型组存活细胞明显减少;而给予尼莫地平、天麻活性成分后，细胞形态结构受损减轻。③通过MTT法对皮层神经元相对活性的检测显示:与模型组比较，尼莫地平2.5、5μg/ml能显著提高神经元的存活率（P＜0.01），成分8#、11#、12#能显著提高神经元的存活率（P＜0.05;P＜0.01），其他成分提高神经元存活率的作用较弱。④神经元经过OGD/R损伤后LDH漏出率明显升高(P＜0.01)，与模型组比较，天麻活性成分8#、11#、12#均能不同程度降低OGD/R皮层神经元LDH漏出率（P＜0.05;P＜0.01）。⑤与正常组比较，模型组神经元内[Ca2+]i显著增加（P＜0.01），与模型组比较，尼莫地平2.5μg/ml和5μg/ml、8#12.5μg/ml、11#25μg/ml和50μg/ml、12#6.25μg/ml和12.5μg/ml均能显著降低模型神经元内[Ca2+]i（P＜0.01）。
结论：天麻部分酚性成分能够减轻OGD/R PC12细胞及大鼠皮层神经元的形态结构受损，提高细胞存活率，减少皮层神经元LDH漏出，具有体外神经保护作用，其机制与降低钙离子超载有关。
天麻药材;酚性成分;生物活性;神经元保护
云南中医学院
硕士
中药学
林青
2013
中文
R285.1;R284.1
74
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）