雌激素及其受体人永生化表皮细胞转染人乳头状瘤病毒E6基因的影响
目的:
人乳头状瘤病毒(HPV)是宫颈癌、头颈部皮肤癌、食道癌等癌症的致病因素。随着口服避孕药的广泛应用以及雌激素替代疗法的使用，雌激素是否会增加雌激素使用者感染HPV的风险目前尚无定论。本实验研究了雌二醇对人永生化表皮细胞转染人乳头状瘤病毒16型E6基因的影响和机制，探讨外源性雌激素的使用是否增加人乳头状瘤病毒感染的风险。
方法:
单层培养的人永生化表皮细胞系(HaCat)以不同浓度的17-β-雌二醇(E2)及4-羟基三苯氧胺（4-OHT）处理后，以脂质体-2000作为载体将含人乳头状瘤病毒16型E6基因的质粒对HaCat细胞进行转染。转染后以荧光相对定量PCR法测定细胞中HPV16型E6基因的表达。在不同的时间点以细胞计数法绘制HaCat细胞生长曲线，以MTT法测定HaCat细胞活性。流式细胞仪检测HaCat细胞凋亡情况与细胞周期分布。BrdU法测定HaCat细胞周期的时相。Western Blot法测定雌激素受体α和β两种亚型蛋白水平的表达。
结果:
1.细胞计数法绘制的生长曲线显示，浓度为10-5-10-7mol/L的E2促进HaCat细胞生长。浓度为10-8-10-9mol/L的E2对HaCat细胞的生长无明显的促进作用。浓度为10-5-10-7mol/L的4-OHT对HaCat细胞的生长无明显的影响。
2.MTT法结果显示浓度为10-6-10-8mol/L的E2明显增强HaCat细胞活性。而浓度为10-5与10-9mol/L的E2与浓度为10-5-10-7mol/L的4-OHT对HaCat细胞的活性无明显影响。
3.流式细胞仪的结果显示经E2处理的HaCat细胞出现了凋亡比率增加，并具有浓度依赖性。同时4OHT处理的HaCat细胞的凋亡率也有轻微增加，但未见明显的浓度相关性。这两种药物都不影响该细胞系细胞周期的各阶段的分布。
4.BrdU法结果显示，E2使HaCat细胞的细胞周期时相缩短，高浓度4-OHT可将细胞周期的时间延长，但其余浓度则对此并无影响。
5.Western blot结果显示E2处理的HaCat细胞雌激素受体-β的表达增加，具有浓度依赖趋势;雌激素受体-α的表达与E2的浓度无明显相关。4-OHT作用后两种雌激素受体的亚型均没有检测到。
6.荧光相对定量-PCR显示经过E2处理的细胞转染人乳头状瘤病毒16型E6基因后，随着E2浓度的增加，人乳头状瘤病毒16型E6基因的mRNA表达明显增加。4-OHT作用后人乳头状瘤病毒16型E6基因mRNA表达减少，但各浓度之间无明显差异。
结论:
1.E2增加人乳头状瘤病毒16型E6基因转染HaCat细胞的效率。其机制可能与E2通过雌激素受体加速宿主细胞生长及增殖有关;
2.E2增加HaCat细胞ER-β蛋白水平的表达;ER-β在E2影响人乳头状瘤病毒16型E6基因转染的过程中可能存在关键性的作用;
3.雌激素受体拮抗剂可能降低人乳头状瘤病毒16型感染的风险。
人乳头状瘤病毒;E6基因转染;雌激素受体拮抗剂;17-β雌二醇;4-羟基三苯氧胺;HaCat细胞ER-β蛋白;宫颈癌
温州医科大学;温州医学院
博士
妇产科学
吕杰强
2012
中文
R737.33;R730.21;R373.9
70
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）