两亲N-磷酰多肽的合成及其在基因运载中的应用
近年来，基因治疗技术已经在生命科学研究中得到广泛发展，主要通过将功能性的外源正常基因转入到目标细胞中表达以纠正或补偿遗传性缺陷和异常引起的疾病，达到治疗目的。基于载体类型差异基因转移的方法分为病毒载体和非病毒手段两大类，目前应用最广泛的是人工合成的非病毒载体，该类载体具有安全性高、易合成、稳定性强、低免疫原性、可调控的靶向特异性、生物相容性好等优点，良好的载体药物应同时具备低毒性和高转染效率。
本论文以N-磷酰氨基酸为结构模型，采用改进的亚磷酸酯法合成了具有不同长度的长链烷氧基亚磷酸酯作为疏水尾链，以六个亲水性氨基酸作为头部，合成了一系列阳离子脂结构:C12-K6，C14-K6，C16-K6，C12-H6，同时合成了含有胆固醇结构的Chol-K6;然后进行了样品与pDNA复合物的制备，琼脂糖凝胶电泳实验结果表明头部含有K6的脂在N/P=3均可将pDNA包裹完全，而含有H6的脂在N/P=10时才能将DNA包裹完全;DLS粒径分析结果表明头部含有K6的脂在N/P=3时能够将pDNA由几百纳米包裹至50nm左右，复合物表面电势的结果表明含有K6的脂在N/P=25时表面电势可达30～40mv，原子力显微镜观察pDNA的粒径为150-200nm，而N/P=3的C12-K6与pDNA形成的复合物粒径均匀分布在20-50nm;用293T细胞进行细胞实验的探究，MTT实验结果表明C12-K6，C14-K6，C16-K6在给药浓度达100mg/L时存活率能保持在80％以上，另外复合物毒性实验结果表明给药浓度一定时，每个样品的毒性都随着复合物的形成有所降低;细胞转染实验结果表明K6进行亚磷酸酯或者胆固醇的修饰后相对阿不加任何修饰的K6转染效率有较高的提升，且随着疏水链长度的增加转染效率呈下降趋势(C12-K6＞C14-K6＞C16-K6)，另外含有C12-K6在N/P=20时转染效率最高，按照一定比例加入的加入C12-H6能够增加C12-K6的转染效率，与PEI-25k转染效率接近。
基因运载;非病毒载体;阳离子脂;细胞转染;基因治疗
北京化工大学
硕士
化学工程与技术
罗施中
2013
中文
R362
82
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）