产莽草酸基因工程菌的构建及发酵研究
莽草酸是一种合成的抗病毒药物奥司他韦（达菲）的关键中间体。莽草酸可以通过化学合成，微生物发酵和从某些植物中提取生产。当前大部分的莽草酸供应来源于中国八角的种子，其易受气候及产地的影响，且生产周期长，成本高。而通过发酵生产莽草酸的水平在不断提高，其他生产方法成本过于昂贵，或没有得到充分开发。在将来通过重组微生物发酵生产莽草酸可能成为首选路线。本课题的目的在于利用基因工程的手段构建高产莽草酸的基因工程菌，主要内容包括:
1、成功构建了重组质粒pBES、pBEGFS、pMBES，在质粒中插入serA基因，以达到增加质粒稳定性的目的。其中pBEGFS质粒实现了莽草酸支路各个合成酶的多基因串联表达，实现高产莽草酸的目的;pMBES质粒含有抗反馈基因aroF，达到了DAHP合成酶不受底物抑制的目的。
2、应用Red重组的方法，利用庆大霉素作为同源重组的抗性标记基因，成功敲除了E.coliGSH的serA基因和ppc基因，为发酵菌株的构建提供基础。
3、成功构建了多株发酵菌株:E.coliGSH∶serA-，pBEGFS;E.coliGSH∶serA-, pMBES; E.coliGSH∶ppc-, pBEGFS; E.coliGSH:ppc-，pMBES; E.coliGSH:ppc-，pBEP、pGFT，在这些菌株中进行发酵培养基的优化和高产菌株的筛选，成功筛选出高产菌株E.coliGSH:ppc-, pMBES。
4、对E.coliGSH:ppc-，pMBES进行了多次的发酵罐补料发酵实验，得到的莽草酸最高产量为5.59g/L。
莽草酸;基因工程菌;RED重组;发酵菌株
北京化工大学
硕士
粮食、油脂及植物蛋白工程
袁其朋
2013
中文
Q781
83
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）