小麦E2基因的克隆及其在叶锈菌侵染过程中的表达分析
E2即泛素结合酶，在植物的泛素-蛋白酶体途径中起到重要的作用。本项研究工作是在前期工作的基础上开展的。本实验室阎爱华等构建了小麦与叶锈菌不亲和互作早期不同时间点的SSH文库，并从中筛选出了一些受叶锈菌侵染而诱导表达的基因，其中就包含E2基因。本试验在此基础上，利用RT-PCR和Western-blotting技术分别在mRNA水平和蛋白质水平对不同亲和性组合中叶锈菌侵染后不同时间E2的表达特征进行了检测。并利用拟南芥突变体对该基因在非生物胁迫方面的功能做了初步检测。通过构建真核表达载体，利用农杆菌转化技术转化拟南芥，得到超表达TaE2基因的拟南芥植株T1代。获得的主要结果如下:
1.利用RT-PCR技术从小麦幼苗叶片中克隆获得了TaE2基因的CDS区。
2.利用生物信息学分析人工合成了TaE2抗原表位的多肽片段，通过免疫新西兰兔获得效价较高特异性较强的抗TaE2的兔抗血清。
3.通过检测TaE2在mRNA和蛋白水平表达量的变化，得出其变化趋势基本一致在不亲和组合中TaE2的表达上调时间早于亲和组合。初步表明该基因可能参与了小麦抵抗叶锈菌侵染的防卫反应。
4.通过分子验证获得拟南芥E2基因突变纯合体，经不同的非生物胁迫试验初步证明AtE2基因与植物的抗盐和抗旱相关。
5.构建了pSuper1300+-TaE2的真核表达载体，运用农杆菌转化拟南芥获得了超表达TaE2基因的T1代植株。
以上结果为进一步研究和探讨TaE2在小麦与叶锈菌互作过程中的作用及其机制奠定了试验基础。
小麦;叶锈菌;泛素蛋白结合酶;TaE2基因表达;反转录PCR技术;免疫印迹
河北农业大学
硕士
植物学
王冬梅
2013
中文
S435.121.43;S512.103.4
41
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）