大豆抗SMV侵染过程中RT-qPCR内参基因的筛选及胼胝质代谢相关基因的表达分析
实时定量PCR(real time quantitative reverse transcription PCR，RT-qPCR)具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点，已被广泛应用于基因的表达分析。大多数传统内参基因已不能满足RT-qPCR准确定量的要求。本研究分析了在四种不同逆境条件下大豆中9个内参基因ACT11、TUA5、CYP、EF1B、TUA4、TUB4、EF1A、ACT27和UKN2的表达稳定性。结果表明:EF1A和ACT11在盐胁迫下表达稳定;TUB4、TUA5和EF1A在干旱处理时表达稳定;ACT11和UKN2在黑暗（衰老）处理时表达稳定;EF1B和UKN2在受大豆花叶病毒侵染时表达稳定;四种胁迫条件下EF1B和UKN2是大豆中比较稳定表达的内参基因。
本实验室前期工作已经证明，在大豆-大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus, SMV)组成的不亲和组合中胼胝质在胞间连丝(PD)上的沉积是阻碍病毒进行胞间转运的关键。在此基础上，利用冀豆7号与大豆病毒株系Sc-8和N3分别组成亲和组合和不亲和组合，以前面筛选得到的病毒侵染时表达稳定的EF1B和UKN2作为内参基因，于接种后不同时间点对参与大豆胼胝质代谢的2个β-1，3-葡聚糖（β-1，3-glucanase，BG）基因和10个胼胝质合酶（Callose synthase，Ca1S）基因的相对表达量进行分析。结果表明β-1，3-葡聚糖酶基因B1和B2在亲和及不亲和组合中接种病毒后均被诱导表达。胼胝质合酶中C7在亲和及不亲和组合中的表达差异明显，其中亲和组合表达量随接种进程基本不变，但在不亲和组合中在接种后8h即开始上调，到接种后144h达对照的54.5倍;C11，C12在两种组合表达趋势相似，在侵染早期（接种后0～12 h）略呈下降趋势，到侵染后期即接种后96 h，不亲和组合表达量开始升高，而亲和组合在接种后96 h和144 h表达量恢复并维持在对照水平;C1，C2表达趋势基本相同，在亲和及不亲和组合均上调表达;C3，C5，C9表达量在两种组合中随接种进程基本没有变化;C8和C10在两种组合中随接种进程均呈现下调趋势。
实验室前期对β-1，3-葡聚糖酶及胼胝质合酶的亚细胞定位表明，在不亲和组合中β-1，3-葡聚糖酶被定位在液泡中，而胼胝质合酶定位在胞间连丝上。但在亲和组合中两种酶均被定位在胞间连丝上。因此我们推测，在大豆病毒侵染过程中两个β-1，3-葡聚糖酶虽然在转录水平被诱导，但在不亲和组合中与胞间连丝处胼胝质的积累无关，而在亲和组合中与胞间连丝上胼胝质的水解可能相关;胼胝质合酶中C7可能在不亲和组合中与胼胝质在胞间连丝上的沉积密切相关，C11，C12可能在接种后期参与此过程。C1，C2，C3，C5，C9，C8及C10均可能不参与不亲和组合胞间连丝处胼胝质的积累过程。
大豆花叶病毒;实时定量PCR;内参基因表达;胼胝质合酶;大豆抗逆性
河北农业大学
硕士
细胞生物学
侯春燕;王冬梅
2013
中文
S565.103.4
45
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）