维生素E对种母鸡繁殖性能的影响及其机理研究
在海兰褐父母代种母鸡饲粮中添加不同剂量的维生素E（以维生素E醋酸酯形式添加，以下简称VE），通过研究VE对种母鸡生产性能、繁殖性能、卵母细胞卵黄生成受体(OVR)基因表达和体外培养的卵泡颗粒细胞增殖和凋亡的影响，从机体、分子和细胞三个层面来解释VE对种母鸡繁殖性能的影响及其调控机制，旨在探索种母鸡获得最佳繁殖性能的VE适宜添加剂量，明确其作用机制，为生产提供理论依据和指导。
试验一研究饲粮VE对种母鸡生产及繁殖性能的影响。试验选用48周龄海兰褐种母鸡288只，随机分成6组，每组4个重复。试验组以VE醋酸酯的形式添加VE，其添加水平分别是0、20、40、80、160和320 mg/kg，预试期2周，试验期8周。结果表明(1)增加饲粮VE浓度，可以显著提高产蛋率，其中160 mg/kg组最高(P＜0.01)，而320 mg/kg组相对160 mg/kg组有下降趋势;(2)改变饲粮中VE的浓度对种蛋蛋重、蛋形指数、哈氏单位、蛋壳相对重、蛋黄相对重和蛋黄颜色等蛋品质未见影响(P＞0.05)，但是160和320mg/kg的添加剂量使蛋壳厚度降低。(3)随饲粮VE添加量的增加，卵泡发育情况和种蛋受精率、受精蛋孵化率、入孵蛋孵化率、初生重、健雏率随之提高，160mg/kg对卵泡发育最好(P＜0.05)，而320mg/kg的孵化成绩最佳(P＜0.05);(4)饲粮VE的添加剂量对血清生殖激素无显著影响（P＞0.05）。
试验二研究饲粮VE对种蛋蛋黄和鸡体组织中α-生育酚沉积(α-T)的影响。建立了测定鸡蛋黄及组织中α-T含量的快速测定方法，进而以此方法分析了饲粮中不同剂量VE对种鸡蛋黄及组织中α-T沉积量的影响。结果发现(1)对样品以甲醇提取后超声处理20min的预处理方法，操作简单，α-T损失少，提取效率明显高于皂化法和甲醇提取后室温静置12h的方法，在所考察的浓度范围内具有良好的线性关系，r为0.9999，20℃浸提10h加标回收率在100.8％～109.00％;(2)随VE添加量的增加，蛋黄、肝脏、心脏中α-生育酚含量呈线性增加，添加320mg/kg浓度达到最大，而肾脏沉积增加不明显。
试验三研究VE对种母鸡OVR基因表达的影响，并对OVR基因表达量与卵黄的VE沉积、生产性能及繁殖性能进行了回归分析。结果:成功扩增出种母鸡卵泡OVR基因片段，大小约110bp;对于OVR mRNA的表达量，40、80 mg/kg添加组(Ⅲ、Ⅳ组)较对照组显著升高（P＜0.05），而160和320 mg/kg（Ⅴ、Ⅵ组）添加组表达量反而降低;OVR基因的表达量与蛋黄VE沉积量、受精率和初生重之间呈倒数关系（P＜0.05）。
试验四研究了VE对种母鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的影响。通过对种母鸡颗粒细胞进行原代培养，观察细胞的生长趋势和增殖情况，并在此基础上研究VE对颗粒细胞增殖的调控作用。结果发现:(1)颗粒细胞体外培养的适应期为24h，72h达到高峰，之后细胞进入停滞期。(2)48h内，随着培养时间的延长，各组细胞增殖率随VE浓度的增加而升高，48h时达到高峰，之后增殖率开始下降，培养至72h，10 mg/L组维持较高的细胞数量，250 mg/L组的细胞增殖率变为负值，即开始抑制细胞生长，其他各组随着添加剂量的升高有显著的降低。
试验五研究了不同浓度VE对种母鸡卵泡颗粒细胞无血清培养所致细胞凋亡的影响。在试验四的基础上，观察对种母鸡颗粒细胞的增殖作用最明显的10 mg/L浓度VE对种母鸡卵泡颗粒细胞氧化损伤和凋亡的保护作用，以流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡情况和细胞周期变化。结果发现:VE有助于促进颗粒细胞由G0/G1期进入S期，使更多颗粒细胞通过G1/S期限制点，从而抑制无血清培养所诱导的种母鸡颗粒细胞的凋亡。
试验结果表明，种母鸡饲粮VE可以通过促进种蛋蛋黄中的VE沉积，提高种蛋受精率、孵化率等繁殖性能;通过促进卵泡颗粒细胞的增殖，减少其凋亡，从而降低卵泡闭锁率，提高母鸡产蛋性能和繁殖性能;种母鸡饲粮中VE对其繁殖性能的促进作用并不依赖于OVR基因的高表达量，还有其它机制存在。
维生素E;种母鸡;繁殖性能;颗粒细胞;饲粮添加剂
河北农业大学
博士
动物遗传育种与繁殖
黄仁录
2013
中文
S831.5
116
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）