马铃薯疮痂病菌分子检测技术的建立
马铃薯疮痂病(Potato scab)是马铃薯生产上的重要经济性病害，该病可由多种植物病原链霉菌(Steptomyces spp.)引起。由于其病原菌组成多样，给病原菌的检测带来较大困难。随着各种PCR技术的发展及在其他病害检测中的成熟应用，为探索马铃薯疮痂病原菌的分子检测方法提供了有益借鉴。本研究在前期获得的不同致病菌株基础上，通过筛选通用特异性检测引物和反应体系确立疮痂病菌的定性检测方法，并结合荧光定量PCR技术摸索病原菌的定量检测方法，所得结果如下:
1.马铃薯疮痂病菌定性检测:根据疮痂病菌特有的毒素合成基因簇中的基因txtA、txtB、txtC(P450)、txtD（nos）序列设计引物，对选择的4个疮痂病菌模式菌株CPS-1(S.scabies)、CPS-2(S.galilaeus)、CPS-3(S.acidiscabies)和CPS-4(S.turgidiscabies)的基因组扩增，筛选到一个通用检测引物B1/B2，该引物对马铃薯疮痂病原链霉菌具有较高的特异性，同期测试的各非致病菌株均无目的条带。优化后反应体系对各模式菌株DNA的检测灵敏度为20 pg/μL，定量转换为菌株孢悬液的浓度后，不同测试菌株有效检测浓度CPS-1为2.48 CFU/μL，CPS-2为3.815 CFU/μL，CPS-3为4.035 CFU/μL，CPS-4为4.035 CFU/μL。取样测试结果表明，该方法可用于疮痂病菌DNA、孢悬液、疮痂病斑组织及疮痂病土的定性检测，结果准确，灵敏度高。
2.马铃薯疮痂病菌定量检测:根据通用检测引物B1/B2扩增获得的核苷酸序列设计荧光定量PCR引物，筛选到符合qPCR条件的引物RTA1/RTA2，经检测，其在各测试菌株中的扩增结果稳定，片段大小符合要求，并且无引物二聚体形成，可以作为qPCR检测引物。分别对4种测试菌株的孢悬液进行定量并提取DNA，稀释至不同浓度作为模板，利用qPCR技术建立标准曲线。利用建立的标准曲线对土壤样品及病组织样品进行测试，结果表明其可对样品进行定量测定。
3.本研究中还通过温室盆栽接种试验检测了导致马铃薯发病的菌株CPS-1的最低孢悬液浓度，浓度梯度测定结果表明，该菌株的最低发病浓度为7.35×10-3CFU/mL。
马铃薯;疮痂病;链霉菌;分子检测;病原菌
河北农业大学
硕士
植物病理学
赵伟全;刘大群
2013
中文
S435.32
60
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）