TcLr35小麦中NBS类抗病基因同源序列的分离及鉴定
小麦叶锈病是我国小麦生产中的主要病害之一，选育抗病品种是防治小麦叶锈病最经济有效的途径。发掘抗叶锈病相关基因及其紧密连锁的分子标记，是进行基因聚合、基因布局和多系品种选育的关键。本研究利用NBS profiling技术和抗病基因同源序列(RGA)法在TcLr35等小麦抗叶锈病近等基因系材料中分离NBS-LRR类抗病基因同源序列。主要研究内容包括以下几个方面:
1.以小麦抗叶锈病近等基因系TcLr35和感病亲本Thatcher为材料，分别在基因组DNA和cDNA中成功构建了NBS profiling体系。
2.选取15个回交6代小麦抗叶锈病近等基因系(NILs)及其感病亲本Thatcher基因组DNA为模板，4种限制性内切酶(AluⅠ、HaeⅢ、MseⅠ、RsaⅠ)和4种简并引物(NBS2、NBS3、NBS5、NBS7)共16种酶/引物组合，利用NBS profiling技术进行DNA指纹图谱分析。结果表明:MseⅠ/NBS2、MseⅠ/NBS5、MseⅠ/NBS7均得到了较好扩增结果，多态性检出率分别为26.4％、26.4％、23.5％; AluⅠ/NBS3、HaeⅢ/NBS3、MseⅠ/NBS3、RsaⅠ/NBS3扩增背景一致，在检测材料间未表现多态性。
3.选取4种限制性内切酶（AluⅠ、HaeⅢ、MseⅠ、RsaⅠ）和13种简并引物(S1、S2、Ploop4、NBS2、NBS3、NBS5、NBS5a、NBS6、NBS7、NBS9、KIN1、KIN5、GLPL4)共52对酶/引物组合，分别在TcLr35和感病亲本Thatcher基因组DNA和cDNA中筛选差异片段，最终在TcLr35中获得6条特异性条带。
4.利用抗病基因同源序列(RGA)法和电子克隆在TcLr35小麦中获得了一条通读的抗病同源基因，该基因长1419bp，包含1323bp ORF区，编码440个氨基酸，含有NB-ARC保守结构域和两个典型的LRR保守结构域，暂命名为TcLr35-S11A11。系统进化树分析表明，其编码蛋白和大麦、燕麦中的NBS-LRR类抗性蛋白亲缘关系较近。利用半定量RT-PCR技术分析，结果表明在取样范围内，TcLr35-S11A11基因的表达不受叶锈菌的诱导，属于低丰度组成型表达，与大多数此类基因表达模式类似。
小麦叶锈病;抗病基因;同源序列;电子克隆;表达模式
河北农业大学
硕士
植物病理学
王海燕;刘大群
2013
中文
S435.121.43
72
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）