ROCK抑制剂Y-27632对角膜上皮的保护性作用及其机制的初步研究
目的:建立H2O2诱导的小鼠TKE2细胞和角膜氧化应激的体内外模型，通过添加ROCK抑制剂Y-27632，研究Y-27632对角膜上皮的保护性作用及其机制。
方法:(1)应用小鼠角膜上皮干/祖细胞系(TKE2)作为细胞模型，用无BPE(牛垂体提取物)的培养基处理2小时，而后用含Y-27632的培养基预干预2小时，再用200μMH2O2处理2小时，24小时后检测细胞内ROS（活性氧自由基）水平、细胞增殖以及NOX4、NRF2的表达情况;收集细胞提取mRNA，定量PCR检测NRF2下游基因的表达情况;(2)选择6-8周龄Balb/C小鼠，随机分为4组，1组为对照组，另外3组采用5μl500μMH2O2角膜局部处理30分钟，而后分别采用PBS（磷酸盐缓冲液）、BSA（牛血清白蛋白）或Y-27632进行干预;一组4小时后取材，二组12小时后再次给予PBS、BSA或Y-27632干预，24小时后取材，分别行ROS、TUNEL、NOX4、NRF2的免疫荧光染色及H.E染色。
结果:Y-27632干预可以显著抑制H2O2诱导的小鼠TKE2细胞和小鼠角膜的氧化应激反应，并呈现典型的时间效应。作用机制包括以下几点:(1)Y-27632通过抑制H2O2诱导的NOX4的表达上调，降低了细胞在H2O2诱导下ROS水平的过度累积;(2)Y-27632抑制了H2O2诱导的NRF2通路的活化，以及下游HO-1、NQO-1、catalase等因子的过度表达，从而避免了NRF2信号通路过度活化引起的细胞应激反应。
结论:ROCK抑制剂Y-27632主要通过抑制NOX4表达和NRF2信号通路过度活化，降低细胞内ROS水平，从而起到保护角膜上皮细胞的作用。
ROCK抑制剂;氧化应激;角膜上皮细胞;动物模型
济南大学
硕士
眼科学
史伟云;周庆军
2013
中文
R772.2
55
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）