胎盘组织液对B群链球菌的增菌培养及围产期孕妇B群链球菌的检测和耐药性研究
目的：⑴制备胎盘组织液，并探讨胎盘组织液作为一种增菌液对B群链球菌增菌效果及可行性，制定有效、经济的实验室增菌培养方法。⑵探讨胎盘组织液作为一种增菌液对B族链球菌的临床分离效果，对其在围产期孕妇B群链球菌的检出率进行分析。⑶分析B群链球菌临床分离株的耐药性，为预防和治疗B群链球菌所致的疾病提供科学的用药依据。
方法：①胎盘组织液的配制:将新鲜已洗干净的人胎盘（去筋膜、血管）500g放入碎肉机绞碎加蒸馏水至1000ml，放置4℃浸泡过夜;第二天，置于45～50℃加热30分钟，用三层纱布过滤，向滤液加蒸馏水补充至1000ml。再加入5gNaCl，混合溶解后，用1mmol/L NaOH矫正胎盘组织液pH为7.4～7.6。然后每管约5ml分装，加塞后高压蒸气灭菌103.43KPa20分钟。冷后放置2～8℃冰箱保存备用两个月，并取名为T-P增菌液。②胎盘组织液的质量检测:把制好的胎盘组织液每1000ml加入5gNaCl，混合溶解后，用1mol/L NaOH矫正胎盘组织液pH为7.4～7.6，然后加塞高压蒸气灭菌103.43KPa20分钟，随机抽取灭菌后的胎盘组织液做无菌试验。取B链球菌标准菌株培养18～24h的菌落配成0.5麦氏单位，采用倍比稀释法将B群链球菌标准菌株稀释成不同浓度进行增菌试验及活菌计数法，然后在不同的pH值的胎盘组织液中进行试验，然后进行活菌计数，并绘制曲线图，最后对胎盘组织液进行混合菌的增菌效果试验。③用无菌拭子分别采集怀孕35～37周的孕妇的阴道和直肠分泌物，并用含庆大霉素的无菌生理盐水洗涤。分别用血平板直接培养法、Todd-Hewrtt增菌培养法(T-H法)及胎盘增菌培养法(T-P法)培养预处理好的标本，根据B族链球菌培养情况、革兰染色、生化鉴定实验、试剂盒凝集试验和VITEK32细菌鉴定仪共同确定结果，并统计上述三种培养方法的阳性检出率及分析其方法学间的差异。④用纸片扩散法对分离鉴定出的B族链球菌进行药敏实验，并用WHONET5.4软件统计分析。
结果：⑴无菌试验结果显示连续3天血平板均未见有细菌生长;增菌和生长试验表明不同菌量浓度的GBS在T-P增菌液中能很好生长;活菌计数试验显示GBS在T-P增菌液中最佳转种时间段是14～20小时，此时，GBS在胎盘组织液中的Lg活菌数在12.15-12.64之间，为最佳生长时期;pH值试验显示GBS在胎盘组织液中最佳生长pH值是6.5-7.0;胎盘组织液对混合菌的增菌效果试验表明，用含庆大霉素的生理盐水洗涤标本后能分离到B群链球菌。⑵对983例围产期孕妇阴道和直肠试子进行检查，结果显示:血平板直接培养法共检出43例，占4.4％; T-H方法110例，占11.2％; T-P方法116例，占11.8％;其中，直肠部位血平板直接培养法检出33例，T-H方法48例，T-P方法53例，阴道部位血平板直接培养法检出31例，T-H方法64例，T-P方法77例。两部位T-H方法与T-P方法检出率相比，差异均无显著性（差异均无统计学意义）（P＞0.005），两部位血平板直接培养法方法与T-H方法、T-P方法检出率相比，差异均有显著性(P＜0.005)。⑶983例围产期孕妇检出GBS116株，检出率为11.8％(116/983)，其中围产期孕妇阴道和直肠部位同时检出GBS的有82株，占8.3％(82/983)，仅阴道部位检出GBS的有79株，占8.0％，仅直肠部位检出GBS的有37株，占3.8％。常见药敏试验:青霉素、头孢曲松、万古霉素未见耐药株，左氧氟沙星的耐药率为21.2％，而红霉素和克林霉素的耐药率较高，分别是69.2％和51.9％。
结论：①本研究所自制的胎盘组织液可作为GBS的增菌液，用于临床围产期孕妇携带的GBS的增菌培养。②自制的胎盘组织液作为增菌液，对GBS的检出率接近Todd-Hewrtt增菌液，因此，能满足临床需要，是一种经济实用的培养基，能够就地取材，制做过程简单，适用基层医院或大中型医院采用。③GBS耐药较严重，对红霉素和克林霉素的耐药率达到69.2％和51.9％，且呈多重耐药，通过定期对GBS耐药性进行分析，为临床合理用药提供理论依据。
B群链球菌;细菌耐药;抗菌药物;临床药理
广东医学院
硕士
病原生物学
刘仿
2013
中文
R378.12;R969
50
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）