咪喹莫特诱导HLA-Cw*0602转基因鼠银屑病样皮肤变化
目的：通过繁育和筛选纯合子HLA-Cw*0602转基因鼠，研究其遗传状况并确定其遗传稳定性。使用咪喹莫特诱导转基因鼠出现银屑病样皮肤变化，检测相关生物学指标，初步分析其可能的原因和机制，为制备银屑病动物模型提供实验依据。
方法：采用PCR法筛选纯合子HLA-Cw*0602转基因鼠，并检测目的基因在HLA-Cw*0602转基因鼠体内的遗传稳定性；采用RT-PCR方法检测转基因鼠皮肤内目的基因mRNA水平的表达，观察转基因鼠皮肤的病理变化；采用咪喹莫特诱导转基因鼠，观察转基因鼠体重和皮肤病理变化，检测其皮肤组织中CD4、CD8、IL-8和HLA-C等的表达，用荧光定量PCR(RTFQ PCR)检测其皮肤中HLA-Cw*0602、IL-17A、IL-17F、IL-22和IL-23等基因在mRNA水平的表达。
结果：从第二代转基因鼠中筛选出纯合子FVB鼠，观察三代均未见转基因鼠表型异常变化，未见近交衰退现象。目的基因在转基因鼠皮肤组织mRNA水平有表达，而在正常FVB鼠无表达。转基因鼠皮肤与FVB鼠皮肤在病理结构上没有明显差异。使用咪喹莫特诱导转基因鼠，小鼠皮肤出现人类银屑病样病理变化的相应特征，而在非转基因鼠对照组仅出现棘层肥厚和血管曲张的变化，空白对照组小鼠未见皮肤病理结构上的变化。免疫组化方法检测咪喹莫特诱导转基因鼠组皮肤中CD4、CD8、IL-8和HLA-C等的分布、定位基本与人类银屑病类似，CD4、CD8表达量均显著高于其他对照组，咪喹莫特上调IL-8的表达，对HLA-C的表达无影响。荧光定量法检测咪喹莫特诱导转基因鼠皮肤中IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-23等在mRNA水平的表达均高于非转基因鼠对照组和空白对照组，且差异有统计学意义，但咪喹莫特不能显著改变HLA-Cw*0602基因在转基因鼠皮肤中的表达。
结论：试验证明，纯合子HLA-Cw*0602转基因鼠在一定的繁殖阶段遗传性能稳定，但不能直接表达出人类银屑病样的病理变化。咪喹莫特能诱导HLA-Cw*0602转基因鼠在皮肤病理学、免疫学上类似银屑病样的改变，其中IL-23/IL-17炎性反应轴在该过程中起重要作用。
银屑病;药物治疗;咪喹莫特;实验药理
广东医学院
硕士
药理学
朱健平
2013
中文
R758.630.5;R965.2
78
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）