半叶马尾藻褐藻多酚的分离纯化及抗氧化活性研究
目的：半叶马尾藻是生长在我国南海海域的一类大型经济藻类，具有分布广、藻体大、生长快等特点，但现在对其开发利用率很低。本研究通过正交试验确定半叶马尾藻褐藻多酚(SHP)的最佳提取条件、对其单体化合物进行初步的分离纯化，同时在体内外分别探讨半叶马尾藻粗提物对氧化损伤小鼠的保护作用及不同分子量褐藻多酚对自由基的清除能力。旨在为半叶马尾藻新活性物质——褐藻多酚的开发利用提供理论依据。
方法：应用正交试验设计确定半叶马尾藻褐藻多酚提取的最佳条件;通过浸提、旋转蒸发浓缩获得半叶马尾藻褐藻多酚粗提物;通过萃取、过柱（硅胶柱、凝胶柱）、薄层色谱等方法分离纯化半叶马尾藻褐藻多酚，采用1H-NMR、13C-NMR、DEPT135和MS等光谱手段对纯化的半叶马尾藻褐藻多酚单体化合物进行结构鉴定;采用四氯化碳对昆明小鼠造成氧化损伤，应用SOD、MDA、CAT、TAOC和GSH-PX试剂盒检测小鼠体内血清、肝脏、肾脏和脑抗氧化活性指标;石蜡包埋切片观察肝脏形态学变化;利用萃取、抽滤和过超滤膜包处理获得不同分子量半叶马尾藻褐藻多酚组分，应用普鲁士蓝法测定各组分总抗氧化能力，DPPH试剂检测SHP清除DPPH自由基的能力，羟自由基检测试剂盒和超氧阴离子检测试剂盒测定不同分子量半叶马尾藻褐藻多酚组体外抗氧化及清除自由基的能力。
结果：⑴通过正交试验确定半叶马尾藻褐藻多酚最佳提取条件为70％乙醇以料液比1∶8摇床振荡提取16h。Folin-Ciocalteu法测得半叶马尾藻中多酚含量为3.24mgGAE(没食子酸当量)/g（海藻干粉）。通过萃取、过柱（硅胶柱、凝胶柱）、薄层色谱等方法分离纯化半叶马尾藻褐藻多酚，获得2个较纯的半叶马尾藻褐藻多酚纯化合物。⑵四氯化碳造模对小鼠肝脏、脾脏、胸腺、肾脏和脑均造成了不同程度的损伤，从各脏器指数看模型组肝脏和脾脏肿大且胸腺萎缩;半叶马尾藻褐藻多酚能提高小鼠肾脏和脑的抗氧化活性。模型组血清及肝脏各项抗氧化指标与正常组比有显著性差异(P＜0.05);半叶马尾藻褐藻多酚高剂量组小鼠血清和肝脏抗氧化指标明显好于模型组(P＜0.05);肾脏和脑的抗氧化活性也好于正常组与模型组。阳性对照维生素C对小鼠抗氧化活性的影响与SHP低剂量组接近。⑶通过超滤获得8个半叶马尾藻褐藻多酚不同分子量组分，分别是水相大于30K(SHPW1)、10K～30K(SHPW2)、5K～10K(SHPW3)和小于5K(SHPW4);乙酸乙酯相大于30K(SHPO1)、10K～30K(SHPO2)、5K～10K(SHPO3)和小于5K(SHPO4)组分。在所有组分中SHPO1抗氧化活性最强。而8个分级组分对羟自由基和超氧阴离子的清除能力均超过了阳性对照没食子酸、维生素C和维生素E。
结论：半叶马尾藻中的褐藻多酚能减轻四氯化碳对小鼠免疫力的损伤，保护其肝脏、脾脏、胸腺、肾脏和脑免受氧化损伤;半叶马尾藻不同分子量组分具有较强的体外抗氧化和清除自由基的能力，尤其是清除羟自由基和超氧阴离子自由基能力更为突出。综上可知半叶马尾藻褐藻多酚具有较强的抗氧化活性，可作为优质天然抗氧化剂应用到药品、食品及化妆品领域，从而提高其经济利用价值。
中药药材;半叶马尾藻;褐藻多酚;药物活性
广东医学院
硕士
药理学
李延平;刘义
2013
中文
R282.710.5;R284.2
70
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）