利用病原真菌毒素离体筛选番茄抗灰霉病突变体
由灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是番茄保护地栽培中常见的病害之一，该病菌能侵染番茄的茎、叶、花、果，给番茄生产造成严重的经济损失。目前主要采用化学药剂防治灰霉病，但长期使用农药会造成环境污染、病菌产生抗药性等问题，种植抗病品种是防治灰霉病最经济有效的方法。目前缺少抗灰霉病的番茄栽培品种，抗性资源主要存在野生番茄中，但野生番茄在利用上存在一定的困难，因此迫切需要寻找一种有效的育种方法。
本研究以番茄品种‘苏粉9号’为试验材料，在研究灰霉菌毒素培养条件的基础上，以灰霉病菌粗毒素为筛选压，对番茄愈伤组织进行抗病突变体离体筛选，获得再生植株，并分析毒素处理后细胞系及其再生植株的酶活性。试验如下:
1.用番茄胚根生长抑制法研究了灰霉菌产毒毒素条件，同时对毒素进行生物活性测定;试验还采用薄层层析法对粗毒素进行初步分离。结果表明，灰霉病菌的最佳产毒条件为pH值为5.0～6.0的PD液体培养基，在20～25℃黑暗条件下连续静置培养20d;经毒素处理后，叶片出现褪绿斑，幼苗萎焉;粗毒素经薄层层析分离出四种组分，各组分在生物活性上有差异。
2.本研究以灰霉菌粗毒素为选择剂，利用多步筛选法进行抗性突变体离体筛选。结果表明:粗毒素对番茄愈伤组织的诱导、生长和分化具有抑制作用，且抑制作用随着粗毒素浓度的升高而增强;在最高粗毒素浓度为40％的多步筛选下，获得了抗性愈伤组织并对再生植株进行接菌鉴定，原始植株作对照，结果表明由抗性愈伤组织再生出的植株病情指数39.00，而对照病情指数为80.00，抗病效果达51.25％。
3.用不同浓度的粗毒素处理突变型愈伤组织及再生植株和原始型愈伤组织及再生植株，研究了不同处理时间后材料的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化。结果表明，粗毒素处理后，愈伤组织和植株酶活性有相同的变化趋势，即先升高后降低;酶活性峰值出现在不同的时间段，但突变型愈伤组织及其再生植株的酶活性高于原始型愈伤组织及其再生植株;用于处理的毒素浓度越高酶活性越高。3种酶活性与番茄抗灰霉病性呈正相关关系。
番茄;离体筛选;抗灰霉病突变体;病原真菌毒素
南京农业大学
硕士
蔬菜学
余文贵
2012
中文
S641.2
73
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）