逍遥散对兔性激素水平及膝关节软骨细胞凋亡相关基因的影响
目的:观察逍遥散对雌性兔性激素水平及软骨细胞调控基因bcl-2，bax表达的影响，探讨逍遥散降低兔膝关节软骨细胞凋亡的可能作用机制，为临床推广应用逍遥散防治骨关节炎提供理论依据。
方法:6月龄雌性新西兰兔40只，体重约2.5-3kg，参照Hulth法制造膝关节骨关节炎模型，术后不固定伤肢，1周后每天驱赶兔子行走两次，共30min，连续4周。查随机数字表将实验动物随机分为逍遥丸组（简称中药组）、硫酸氨基葡萄糖组（简称西药组）、逍遥丸合硫酸氨基葡萄糖组（简称复合组）、模型对照组（简称对照组），每组10只。造模后一周后开始给予药物治疗，药物剂量参考Meeh-Rubner公式按体表面积折算的等效剂量，中药组按8丸/d/只配置成30ml液体灌胃，连续给药8周。西药组按2粒/d/只配置成30ml液体灌胃，连续给药8周。复合组分别给予逍遥丸8丸/d/只合硫酸氨基葡萄糖2粒/d/只，连续给药8周。对照组不予任何处理，所有动物同样条件下饲养。造模后第12周末取材，各组动物耳缘静脉麻醉处死，无菌操作下切开右膝关节腔，肉眼大体观察关节软骨的颜色、光泽、光滑度等变化情况;血清检测雌二醇、睾丸酮含量;HE染色、甲苯胺蓝染色，光镜观察膝关节软骨组织并进行Mankin's分级评分，比较各组间的差异;然后取内侧胫骨平台软骨组织，修剪成大小约0.5cm×0.5cm×0.5cm组织块置于4％多聚甲醛固定。软骨组织切片用TUNEL法（脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法）观察软骨细胞凋亡，免疫组织化学法观察软骨细胞bcl-2和bax的表达。
结果:1.大体观察:中药组、西药组，复合组与模型对照组比较，软骨磨损、退变程度明显减轻;光镜下观察，各药物治疗组与模型对照组比较，Mankin's评分明显降低，电镜观察发现，各药物治疗组关节软骨细胞的形态、结构、排列等均优于对照组。2.各组动物性激素含量无统计学意义(p＞0.05);对照组软骨组织中度损伤，中药组、西药组和混合组软骨组织轻度损伤，结果比较有统计学意义;3.软骨细胞凋亡率:中药组(16.92±1.71)、西药组(17.01±1.61)、复合组(10.19±1.28)，三组和对照组(30.19±3.08)比较均较低，P＜0.01);中药组和西药组组间相比，差异无统计学意义(p＞0.05)。4.软骨细胞中Bcl-2表达的影响:中药组(19.97±1.48)、西药组(16.34±2.26)、复合组（16.99±2.55），和对照组(8.02±2.09)比较，三组都较高，差异有统计学意义（P＜0.01）;Bax表达的影响:中药组(6.73±1.15)、西药组(7.19±1.71)和复合组(7.09±1.41)，和对照组(26.69±2.78)相比，三组均较低，差异有统计学意义。
结论:1.从理论上说，逍遥散可治疗月经不调，必然对性激素的水平有调节作用。但本课题的研究结果提示疏肝养血法对实验兔性激素水平没有产生明显的影响，主要原因考虑与课题设计缺陷有关。兔子的性周期内雌激素水平波动较大，取样时缺乏统一的时机点，对雌性兔性激素水平的影响有待进一步研究。
2.逍遥散通过上调bcl-2的表达，下调bax的表达，以抑制兔膝关节软骨细胞的过度凋亡，这可能是其调控软骨细胞凋亡的机制之一。
逍遥散;细胞凋亡;性激素水平;骨关节炎
广西中医药大学
硕士
中医骨伤科学
戴七一
2013
中文
R684.3;R285.5
60
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）