半枝莲醇提物含药血清对大鼠肝星状细胞相关蛋白影响的研究
目的:
通过观察半枝莲醇提物含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的作用与影响，探讨半枝莲醇提物对大鼠HSC-T6作用，通过观察α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的含量、TGF-β1等指标的变化来研究其对大鼠HSC-T6合成和降解ECM的作用，为进一步研究半枝莲抗肝纤维化作用提供数据支持。
方法:
采用半枝莲生药4倍量的70％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，得到的半枝莲醇提物浸膏在60℃水浴将乙醇蒸发后，4度冰箱保存。随机选择SD大鼠25只，每只体重约250g左右，随机分成5组:正常血清对照组（A组）5只，半枝莲高剂量组（B组）5只，半枝莲中剂量组(C组)5只，半枝莲低剂量组（D组）5只，秋水仙碱灌胃组（E组）5只，其中A组给予等量的生理盐水灌胃。灌胃开始前一周自由饮食，适应环境。灌胃方法:采用通法给药方案，给药前禁食不禁饮4小时，每日灌胃给药2次，连续给药3日，末次给药1h后采血，分离出含药血清，灭活后过滤除菌，-20℃冰箱保存。以含10％胎牛血清的DMEM将处于对数生长期的HSC-T6稀释制备为1×105个细胞/ml悬液，按1ml/孔添加细胞悬液于六孔板培养皿中孵育24h，孔内预先放置20mm×20mm盖玻片，待细胞完全贴壁后进行试验分组。具体试验分组:空白对照组(a)、高浓度半枝莲含药血清组(b)、中度半枝莲含药血清组(c)、低浓度半枝莲含药血清组(d)、秋水仙碱含药血清组(e)共5组。以每块六孔板为1组，共测试4个指标，每块盖玻片用做一种蛋白的免疫组化染色，重复3次。添加含药血清方法:用DMEM（不含胎牛血清）按1∶10的比例将各组大鼠血清稀释，配置浓度为10％大鼠含药血清工作液;将配置好的工作液按2ml/孔添加到对应各组培养板中，孵育24h。用4％多聚甲醛固定后捞起盖玻片风干后，用细胞酶免疫组织化学方法染色观察Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、α-SMA、TGF-β1沉积的部位和面积。
结果:
1.高、中、低半枝莲组、秋水仙碱组分别于空白组比较，各组HSC-T6细胞的Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、α-SMA和TGF-β1这四种蛋白的表达水平均下调，表达的相对面积缩小，颜色从棕黄色变为浅黄色，比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
2.高、中、低半枝莲组与秋水仙碱组对比，其中高剂量半枝莲组的四种蛋白的表达水平均明显低于秋水仙碱组，差异有统计学意义(P＜0.01)。
结论:
1.半枝莲醇提物具有降低HSC-T6细胞表达Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、α-SMA和TGF-β1水平的能力，从而抑制了ECM的形成。
2.高剂量的半枝莲醇提物，在抑制HSC-T6降低HSC-T6细胞的蛋白分泌功能方面能力较秋水仙碱强。
半枝莲醇提物;肝星状细胞;血清检测;肝纤维化
广西中医药大学
硕士
中西医结合基础
李中华
2012
中文
R285.5;R575.2
62
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）