夏枯草酸性多糖的理化性质分析及活性研究
夏枯草(Prunella vulgaris Linn)为唇形(La.biatae)夏枯草属(Prunella)植物，主要成分有糖类、黄酮类、香豆素、有机酸、挥发油及三萜类等，具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗肿瘤、降血压等作用。夏枯草是传统中药之一，全草均可入药，其嫩茎叶或花穗也可食用，因此具有广泛的药用和食用价值。本论文以夏枯草为原料，对其多糖进行了比较系统全面的研究，主要研究内容与结果如下: (1)夏枯草多糖的脱色工艺。运用水提醇沉的方法获得了夏枯草多糖粗提液，然后在单因素实验的基础上，以多糖保留率、脱色率和蛋白质去除率为指标，研究了树脂种类、pH值和脱色温度对夏枯草多糖脱色效果的影响。通过响应面分析，确定了夏枯草多糖脱色的最佳工艺条件，即树脂种类为DA-201，pH值为3.5，温度为25℃。在此条件下，多糖保留率为71.33％，蛋白质脱除率为89.50％，脱色率为81.62％。 (2)夏枯草多糖的分离纯化。脱色后的夏枯草粗多糖(CP)经DEAE-Sepharose FF离子交换柱分离后，可得到2个酸性多糖(AP-1和AP-2)，其含量分别为49.08％±0.56％和22.07％±0.26％。将AP-1和AP-2分别用Sephadex G-100和Sephadex G-50凝胶进行纯化，纯化后各组分的己糖醛酸含量分别为11.21％±0.13％和52.73％±0.6％。 (3)夏枯草多糖的理化性质分析。将夏枯草多糖用气相色谱、高效凝胶渗透色谱、同步热分析、扫描电镜、红外光谱等进行分析。结果表明，CP由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖组成，其质量百分含量分别为0.6614％、1.5223％、3.2199％、2.0772％和1.8442％;AP-1由木糖(2.6951％)、阿拉伯糖(5.0743％)、葡萄糖(6.2249％)组成;AP-2由鼠李糖(0.9857％)、木糖(1.7568％)、阿拉伯糖(3.2029％)、甘露糖(0.6806％)、葡萄糖(1.9753％)组成。两种酸性多糖的重均分子量分别为358608 Da和57234 Da。AP-1和AP-2在200℃附近开始发生降解，到600℃降解基本完成，说明这两种多糖热稳定性良好。由扫描电镜可知，AP-1呈薄条状且无规则卷曲，表面非常光滑;AP-2呈薄片状且无规则卷曲，表面较为光滑。 (4)酸性多糖衍生物的制备及表征。AP-2经脱硫和硫酸化修饰后得到3个衍生物AP-2D、AP-2L及AP-2H，4种多糖的硫酸根含量分别为0.305％，6.58％，30.95％和36.35％。经红外光谱检测，各多糖不仅含有多糖的特征性基团，还含有糖醛酸的特征基团。同时，AP-2、AP-2L及AP-2H中还明显含有硫酸根的特征基团。 (5)夏枯草酸性多糖及其衍生物的抗氧化活性分析。夏枯草多糖对DPPH自由基、羟基自由基、亚硝酸根自由基和ABTS自由基的清除能力及还原力大小的研究。结果表明，夏枯草多糖对各种自由基具有一定的清除能力，其清除能力随多糖浓度的增加而逐渐增强。各多糖清除DPPH自由基的IC50分别为CP:0.75 mg/mL; AP-1:3.16mg/mL; AP-2D:1.67 mg/mL; AP-2:0.98 mg/mL; AP-2L:0.93 mg/mL;AP-2H:0.85 mg/mL。清除羟基自由基的IC50分别为CP:0.76 mg/mL;AP-1:2.58mg/mL; AP-2D:1.57mg/mL; AP-2:1.14mg/mL; AP-2L:1.02mg/mL; AP-2H:0.91mg/mL。清除亚硝酸根自由基的IC50分别为CP:1.41mg/mL; AP-1:2.59mg/mL; AP-2D:2.03mg/mL; AP-2:1.54mg/mL; AP-2L:0.59mg/mL; AP-2H:0.64mg/mL。清除ABTS自由基的IC50分别为CP:0.43mg/mL; AP-1:2.21mg/mL; AP-2D:1.60mg/mL; AP-2:1.11 mg/mL; AP-2L:0.96mg/mL; AP-2H:0.57mg/mL。CP、AP-1、AP-2从夏枯草中直接获得，其清除能力大小顺序依次为:CP＞AP-2＞AP-1。AP-2及其衍生物的清除能力大小顺序依次为:AP-2H＜AP-2L＜AP-2＜AP-2D，其硫酸根含量大小顺序依次为AP-2H＞AP-2L＞AP-2＞AP-2D。结果表明，随着硫酸根含量的增加，多糖对自由基的清除能力也逐渐增强。几种多糖还原力大小顺序依次为CP＞AP-1＞AP-2D＞AP-2＞AP-2L＞AP-2H。 (6)夏枯草酸性多糖及其衍生物的免疫活性分析。结果表明，夏枯草多糖能够增强巨噬细胞吞噬中性红的能力、提高巨噬细胞的活力、促进巨噬细胞一氧化氮的分泌、增强巨噬细胞酸性磷酸酶活性、促进巨噬细胞IL-1的分泌以及增强T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖能力，且随着浓度的增大作用逐渐增强。当浓度大于等于160μg/mL时，各多糖免疫活性的增强作用与空白组相比差异显著(P＜0.01)，各多糖的体外免疫增强作用的大小顺序依次为:AP-2H＜AP-2H＜AP-2＜CP＜AP-2D＜AP-1。因此，随着浓度和硫酸根含量的增加，各多糖的体外免疫活性逐渐增强。
夏枯草;酸性多糖;理化性质;制备工艺;结构表征;免疫活性
西南科技大学
硕士
应用化学
熊双丽
2013
中文
O629.12;R284.1
92
2013-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）