眼镜蛇毒金属蛋白酶激活和损伤内皮细胞的机制研究
目的:研究眼镜蛇毒P-Ⅲ型金属蛋白酶Atrase B通过补体致内皮细胞活化和损伤的作用机制。
方法:首先对补体旁路激活产物致内皮细胞信号通路的活化及抑制剂干预情况进行研究，为研究眼镜蛇毒金属蛋白酶Atrase B经补体作用内皮细胞的机制提供参照和背景。采用两种眼镜蛇毒蛋白（CVF、Atrase B）分别与正常人血清孵育。将血清孵育物作用于人微血管内皮细胞(HMEC)，用ELISA方法检测内皮细胞培养上清中的黏附分子、炎症因子、趋化因子等的表达情况以及细胞内NF-κB、p38MAPK及JAK2通路的活化情况。分别采用上述3个信号通路抑制剂PDTC、SB203580和AG490对其活化及黏附分子ICAM-1、MCP-1的表达进行干预研究。用western blot法检测AtraseB与血清或补体成分孵育后细胞内NF-κB和JAK2通路的磷酸化情况。
结果: CVF使血清补体旁路途径活化后可导致HMEC释放的P-selectin和ICAM-1明显增加。细胞内JAK2、p38MAPK、NF-κB通路明显活化，分别在刺激2、15、30min后，分别检测到3个通路的活化高峰;PDTC、SB203580、AG490可分别抑制NF-κB、p38MAPK、JAK2通路的活化。AG490对内皮细胞活化后的ICAM-1蛋白表达有明显的抑制作用，PDTC、SB203580对ICAM-1表达没有明显影响。眼镜蛇毒P-Ⅲ型金属蛋白酶Atrase B与血清孵育后，可致HMEC瞬时释放P-selectin和vWF，进而使E-selectin、ICAM-1的表达上调。细胞内JAK2和NF-κB通路明显活化，且分别在2、30min检测到其活化高峰。Atrase B与血清孵育后未检测到p38MAPK通路的活化。PDTC和AG490对MCP-1的表达都有抑制作用。Western blot检测结果显示:AtraseB与血清孵育后，NF-κB和JAK2通路发生了磷酸化。Atrase B与补体成分C6孵育后，也检测到NF-κB的磷酸化。
结论:Atrase B与血清孵育后可使内皮细胞相关炎症因子、黏附分子的表达上调，其机制可能是Atrase B酶切补体产生活性片段，诱导内皮细胞炎症相关通路的激活。Atrase B与血清补体孵育对内皮细胞的活化与CVF激活补体旁路对内皮细胞的作用既有相似性，也有不同。Atrase B作用血清补体后，可使细胞内NF-κB和JAK2通路明显活化，而未检测到p38MAPK通路的活化。其中对JAK2通路有效抑制可使MCP-1和ICAM-1的表达下调，提示JAK2通路有可能是补体相关炎症的潜在干预靶点。
眼镜蛇毒;金属蛋白酶;内皮细胞;核转录因子
遵义医学院
硕士
药理学
孙黔云
2013
中文
R96;R363.2
75
2013-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）