地黄活性物质与功能研究
地黄Rehmannia glutinosa Libosch系玄参科地黄属植物，又名地髓，芑等。块根入药，现人工种植，现主产区在山西、河南等省。地黄由于加工炮制方式的不同分为鲜地黄、生地黄和熟地黄，具有清热、抗贫血和滋补等功效。现代科学研究证明地黄主要化学成分为糖类、环烯醚萜类、倍半萜类和苯乙醇苷类，具有降血糖、神经保护等多种生物活性。
本论文运用多种色谱技术和波谱技术，并结合化学方法，对鲜地黄进行了系统的化学成分研究，并对其粗提物及单体成分进行了药理活性筛选。
从鲜地黄的95％乙醇提取物中共分离鉴（测）定了110个化合物，结构分别为:地黄新苷A-K(1*-11*)，jioglutin F(12*)，地黄新萜A-F(13*-18*)，1,4,5,6-四氢-1-甲基-6-氧代-3-吡啶乙酸(19*)，梓醇(20)，益母草苷A(21), myoporoside(22)，桃叶珊瑚甙(23)，单蜜力特苷24),5-deoxyantirrhinoside(25),二氢梓醇(26), myobontioside A(27),3'-O-β-D-glucopyranosyl-catalpol(28),蜜力特苷(29)，地黄苷C(30)，地黄苷A(31),5-deoxylamiol(32)，去乙酰野芝麻苷(33)，栀子新苷(34),8-表番木鳖酸(35)，栀子酸(36), mussaenosidic acid(37)，栀子新苷甲酯(38)，栀子苷(39),8-表番木鳖碱(40), jioglutoside B(41)，京尼平龙胆双糖苷(42), genipin1-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(43), genameside C(44),6-O-E-feruloyl ajugol(45),6-O-vanillate ajugol(46),6-O-p-hydroxybenzoyl ajugol(47),6-O-(4"O-α-L-rhamnopyranosyl)vanilloyl ajugol(48),6-oxo-4'(3-methoxyl-4-hydroxyphenylglycol-8")-feruloyl-ajugol(49-50),6-O-E-caffeoyl ajugol(51),6-O-sec-hydroxyaeginetoyl ajugol(52), aeginetoyl ajugol5"-O-β-D-quinovoside(53)，京尼平(54), jioglutins D(55),6β-hydroxy-2-oxabicyclo[4.3.0]△8-9-nonen-1-one(56), jioglutins E(57)，野菰酸(58), dihydroxy-β-ionone(59), rehmapicrogenin(60), trihydroxy-β-iononem(61), sec-hydroxyaeginetic acid(62), aeginetic acid5-O-β-D-quinovoside(63), neo-rehmannioside(64), dihydrophaseic acid4'-O-β-D-glucopyranoside(65), rehmaionoside C(66)，黑蒴苷(67), rehmaionoside A(68), rehmaionoside B(69), oxyrehmaionoside B(70)，地黄苷(71), sculponiside(72),2-phenylethyl-O-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(73)，阿克替甙(74)，红景天苷(75), leucosceptoside A(76), jionoside D(77), deacyl-martynoside(78), jionosides A1(79), jionosidesB1(80),3,4-dihydroxy-β-phenethyl-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-O-β-D-galacopyranosyl-(1→6)-4-O-caffeoyl-β-D-glucopyranoside(81)，香草醛(82),1-(4-methy-2-furanyl)-2-(5-methyl-5-ethenyl-2-tetrahydrofuranyl)-propan-1-one(83)，顺式细辛醚(84)，丁香酚(85)，异丁香酚甲酯(86)，阿魏酸(87)，苯甲酸(88)，丁香酸(89)，β-谷甾醇(90)，腺苷(91)，腺嘌呤(92), rhamnopyranosyl vanilloyl(93), syringicacid-4-O-α-L-rhamnopyranoside(94),2-methoxy-4-methylphenyl-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(95),葡萄糖(96)，半乳糖(97)，水苏糖(98)，蔗糖(99)，甘露三糖(100)，棉子糖(101),yemuoside YM1(102-103),(7R,8S,7'R,8'S)-4,9,4',9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-7,7'epoxylignan9-O-β-D-glucopyranoside(104),1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(105),tachioside(106),isotachioside(107)，丙烯酸(108)，邻苯二甲酸二丁酯(109)。另外，首次分离得到梓醇苷元(110)。
分离得到的110个化合物中，包括51个环烯醚萜(1*-12*，20-57，110)，19个单萜、倍半萜和降倍半萜(13*-18*，58-70)，10个苯乙醇苷(71-72，74-81)和30个其它类型化合物(19*，73，82-109)。其中化合物1*-19*为19个新化合物。
抗肿瘤方面，采用MTT法测定了地黄提取物各部位(图2-4-1)和97个单体化合物对五种人肿瘤细胞的抑制作用。结果显示地黄提取物各部位均无明显的抗肿瘤活性，单体化合物均没有表现出细胞毒活性(IC50＞10μM)。
保肝和抗肝损伤方面，采用Fe2+-半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质过氧化模型，测定地黄部分97个化合物的抗氧化活性。结果显示新化合物5在10-5M时表现一定的抗氧化活性（抑制率=23％）;同时，化合物51，76-77在10-5M也表现一定的抗氧化活性。采用扑热息痛（APAP）引起体外肝细胞损伤的保护模型，测定地黄部分97个化合物的肝保护活性。化合物71-72，74-75，79-80，100在10μM浓度下有一定的保护作用，活性与相同浓度的阳性对照药双环醇相当。以MTT法观察地黄提取物各部位对人肝细胞HL-7702细胞成活率的影响，结果显示，部位1，3，5，10-14有较明显的保肝活性，进一步考察显示化合物11，23，30，34，58，62，68，73，75，90，93，95有明显的保肝活性。
抗炎方面，采用给巴豆油致耳部炎症小鼠皮下注射相应受试物(100 mg/kg)的方法，显示地黄提取物部位5，10，13，14可较明显的抑制小鼠耳肿胀，显示出一定的抗炎活性。单体化合物可以一定程度上抑制LPS诱导的细胞对NO的生成，与阳性对照地塞米松(浓度10-6 M)相比，部分化合物在浓度10-5M显示出一定的活性
抗流感病毒方面，与阳性对照扎那米韦相比，地黄部分化合物对抗流感病毒神经氨酸酶均没有显示出活性。
镇静催眠和抗溃疡方面，采用戊巴比妥钠协同睡眠模型，小鼠腹腔注射给药测定地黄提取物各部位的镇静催眠作用，以入睡率为评价指标，地黄各部位均显示出一定的镇静催眠作用，但不强，与阳性对照安定相比差太多。采用测定H+-K+-ATP酶活性对地黄提取物各部位的抗溃疡活性进行评价，结果各部位均无明显抑制活性。
降血脂方面，地黄提取物各部位对降低甘油三酯活性均无较明显抑制活性。
神经保护方面，地黄提取物部位7在1、10μg/ml剂量下对去血清损伤PC12细胞均具有保护作用;部位13在10μg/ml下对鱼藤酮损伤具有保护作用;部位8，12对缺糖缺氧损伤的PC12细胞具有加重损伤作用。进一步测试显示化合物74，77，81和98在10μM浓度下对鱼藤酮损伤细胞具有保护作用。
调节钾通道作用方面，利用荧光膜电位法筛选出潜在钾通道阻断剂22个。
降血糖方面（体外），地黄提取物各部位对PTP1B酶均无较明显抑制活性。地黄提取物部位1有较明显的醛糖还原酶抑制活性，IC50在3.5μg/ml，化合物74有明显的醛糖还原酶抑制活性，IC50在2.68×10-7μM，其它化合物在浓度10-5μM抑制率均＜69.4％。各部位在10μg/ml浓度下对FBPase1均无显著抑制作用，进一步显示各化合物在10μM浓度下对FBPase1均无显著抑制作用。地黄提取物各部位在40μg/ml浓度下对α-葡萄糖苷酶无显著抑制作用，化合物在浓度40μM对α-葡萄糖苷酶抑制率均＜32.4％，无明显抑制活性。化合物51，74，77，81在浓度10μM对脂肪酶有明显的抑制活性。地黄提取物各部位对DPP-Ⅳ抑制活性均＜13.0％，无较明显抑制活性。地黄提取物部位3和部位12对GK激活倍数接近阳性化合物。地黄提取物各部位对PPARγ受体的激活倍数均＜1.10，无较明显抑制PPARγ转录活性。
降血糖方面（体内），梓醇在剂量50 mg/kg和200 mg/kg灌胃给药（每天一次，连续给药）对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖在一定程度上有降低作用;腹腔注射（一次给药）对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖无明显降低作用(50、200、300 mg/kg);在50 mg/kg和200 mg/kg灌胃给药（每天一次，连续给药）对自发性2型糖尿病KKay小鼠血糖未见明显降低作用。
地黄;化学成分;药理活性;分离鉴定
北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院
博士
药物化学
于德泉
2013
中文
R282.71;R284.1
269
2013-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）