野生鸟类及山鸡禽白血病流行病学调查
禽白血病是由反转录病毒科禽白血病病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称。本病在世界各地均有发生，是危害养禽业的主要疾病之一。根据传播方式禽白血病分为内源性禽白血病(ALV-E)和外源性禽白血病。鸡外源性禽白血病病毒根据病毒感染宿主范围、血清中和及干扰实验和病毒的基因组结构被划分为A、B、C、D和J亚群。A亚群病毒感染病例临床上较为常见，B亚群病毒感染引起的自然病例则较少。由于本病流行所造成的直接经济损失相对较小，曾一度不被人们所重视。自从20世纪末J亚群禽白血病在世界范围内爆发、流行以来，给养禽业造成了巨大的经济损失，这才被人们所重视。虽然国内已经有很多关于禽白血病流行病学的报道，但主要集中在家禽上，国内尚无关于野生鸟类感染禽白血病的报道，也未见有关山鸡感染的报道。为掌握我国野生鸟类及山鸡ALV的流行情况，本研究于2010-2011年在我国东北地区进行了野生鸟类ALV-A、B和J分子流行病学调查及重要基因序列分析;在山东省德州市平原县山鸡养殖基地从8个场采集血样152份进行ALV-A/B、J抗体检测。试验结果表明:用PCR方法从我国东北地区300份野生鸟类病料中检测出2份ALV-A、4份ALV-B和7份ALV-J阳性病料;以GenBank上发表的ALV-J原型株HPRS-103为参考株，设计了4对特异性引物，成功扩增出1株ALV-J前病毒基因组序列，命名为WB11098(J)。
对13份ALV阳性病料进行了env基因扩增，然后与各亚群代表毒株进行序列分析。结果发现:(1)通过比对A亚群各毒株gp85基因发现与美国蛋鸡分离株MQNCSU氨基酸同源性最近为97.6％，推测2个A亚群检测株可能来源于美国鸡群;通过对B亚群检测株env基因进行遗传进化树分析，4个B亚群检测株与国外原型毒株RAV-2和代表毒株Schmidt-Ruppin B同源性较近，说明此次获得的4株B亚群禽白血病检测株可能来源于美国鸡群;但是对J亚群检测株env基因比对分析发现，7株J亚群检测株与国内蛋鸡分离毒株JL08CH3-1同源性较近，与A，B亚群检测株env基因的特点不同。
对WB11098(J)全基因组进行了序列分析，结果表明:WB11098(J)全基因组长度为7869bp。与GenBank上公布的ALV-J参考毒株相比，WB11098(J)有以下序列特征:(1)对于5'LTR，在第1位前有5个核苷酸(TGTTAT)插入，C/EBP元件因第11和第12位之间有9个核苷酸(ACTCTTGTA)插入而缺失;AIBREP1元件内，第107位“A”变为“G”，剩余的元件没有发生变化，依然保守。(2) WB11098(J)5'UTR长度为398 bp，在相当于HPRS-1035'UTR362～363位碱基插入了长度为19bp序列，与原型毒株 HPRS-103相比较，除有19bp插入以外，另有29处核苷酸变异，变异较大;(3)本研究中WB11098(J)ALV-J gag和pol基因非常保守，env基因呈现高度多样性和大量氨基酸突变。变异主要集中gp85基因，主要表现在碱基突变后引起氨基酸化学性质的改变。
从8个场152份山鸡血清样品经ELISA检测，共检出4份阳性:其中ALV-A、B3份;ALV-J1份。我国许多地方特有品种禽类（如芦花鸡、麻鸡）已被ALV感染，尽管此次从山鸡中检出的禽自血病阳性率较低，但这是在山鸡中首次检出，由于禽白血病病毒可以水平传播和垂直传播，所以不能忽视其对珍稀禽种的潜在危害。
本研究从300份野生鸟类病料中检测到13份ALV阳性病料，为研究野生鸟类ALV提供了丰富素材，极大的丰富了ALV流行病学资料;通过克隆其变异较大的基因分析了我国野生鸟类ALV的来源;本研究还成功克隆了一株野生鸟类ALV-J的全基因组序列，了解了野生鸟类ALV-J序列特征。另外，本试验还从山鸡样品中首次检测到4份ALV阳性血清，初步了解了我国家养山鸡的禽白血病感染情况。
野生鸟类;山鸡;禽白血病;流行病学调查;全基因组;序列特征
山东农业大学
硕士
基础兽医学
刘思当
2013
中文
S851.31;S858.3;S855.3
68
2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）