黑索金和奥克托金的LC-MS/MS定性和定量方法研究及在大鼠体内的应用
目的:应用液相色谱串联质谱高通量平台，研究黑索金(RDX)和奥克托金（HMX）的质谱行为，并建立一种简单、快捷、灵敏度高的RDX和HMX体内同时定量的液相色谱串联质谱定量检测方法，并将其应用于大鼠血浆样本，用以验证定量分析方法的准确性，为临床硝胺化合物中毒的早期发现及救治提供方法支持。
方法:取RDX或HMX(10μg·mL-1)的对照品溶液蠕动迸样，进行Q1全扫描，再以各母离子为对象进行二级碎片离子扫描，根据母离子和二级碎片离子信息，推导各离子对归属，寻找RDX和HMX的质谱裂解规律。分别进行色谱条件优化、质谱条件优化、前处理方法摸索等步骤，建立定量分析方法，并进行全面的方法学验证。建立简易含硝胺化合物的大鼠模型，采集不同时间点的血浆样本，用建立的定量分析方法对血浆中RDX和HMX的含量进行测定。根据浓度-时间数据采用DAS2.0软件进行药动学参数计算，进行硝胺化合物在大鼠体内的代谢动力学评价;考察给药组及空白组血浆中肝脏肾脏ALT、ALP、AST指标变化;给药后8h大鼠颈椎脱臼处死，解剖取肝脏肾脏进行病理学组织考察。
结果:RDX和HMX均与流动相中的杂质加合成[M+Cl]-、[M+HOCH2COO]-加合离子，它们的碎片离子主要是失去特征的NO2-、CH2NNO2-离子。RDX与硝胺碎片加合，形成[M+NO2-H]-、[M+CH2NNO-H]-和[M+NO3]-加合离子，HMX与硝胺碎片加合成m/z377.0[M+C3H3N3]-离子，其子离子155.0[C3H3N3]-为HMX的结构鉴定提供有力证据。建立了一种快速、有效的同时定量检测大鼠血浆中RDX和HMX的LC-MS/MS定量分析方法。RDX、HMX和内标霉酚酸经过简单的蛋白沉淀前处理，用乙腈和水作为流动相在C18色谱柱上得到较好分离，洗脱时间仅为8 min。应用ESI源负离子模式进行MRM扫描，RDX的定量离子对为m/z284.1→61.7，HMX的定量离子对为m/z331.0→108.8，内标的定量离子对为m/z319.2→m/z191.1。采用溶剂稀释标准溶液作为定量标准曲线，以未知样本测得浓度除以校准系数进行准确定量。RDX和HMX的定量范围均为5-200 ng· mL-1。RDX的回收率为60.04±4.18％，HMX的回收率为79.57±3.35％。该方法的精密度与准确度均在±15％以内，满足定量分析的要求。血浆样本连续两次进样、室温放置4h、三次熔融和长期冻融下均稳定。用建立的LC-MS/MS定量检测方法对含硝胺化合物大鼠血浆样本进行定量检测，血浆中RDX的浓度由141.72 ng·mL-1降至14.69 ng·mL-1;HMX的浓度由30.39 ng·mL-1降至1.24 ng·mL-1，证明该定量方法能够应用于实际血浆样本分析。大鼠尾静脉注射0.5 mL硝基胺类化合物混合水溶液后，RDX的t1/2为(324.68±188.91) min, Cmax为(127.50±28.39) ng·mL-1, AUC0-t为(24164.75±5401.43) ng·min·mL-1;HMX的t1/2为(134.88±100.01) min,Cmax为(26.78±7.82) ng·mL-1,AUC0-t为(3787.55±2587.03)ng·min·mL-1。给药后大鼠肠胀气，但肝脏肾脏组织均未见病理变化。
试验结论:RDX和HMX均形成错综复杂的加合离子，质谱行为也有一定相似;[C3H3N3]-为HMX特有的离子，能够用于HMX的结构鉴定。建立同时测定大鼠血浆中RDX和HMX的LC-MS/MS方法，操作简单、快速、灵敏度高，能够应用于实际血浆样本中RDX和HMX的分析。 RDX和HMX在血液中分布比例小，两者消除速率有显著性差异。注射硝胺化合物后大鼠肠胀气，但病理组织学无变化。
黑索金;奥克托金;定量检测;液相色谱串联质谱;硝胺化合物中毒;准确性验证
湖北中医药大学
硕士
药理学
刘丽宏
2013
中文
R969.1
87
2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）