片仔癀对裸鼠原位移植骨肉瘤的作用及机制研究
目的:观察片仔癀对裸鼠原位移植骨肉瘤生长及肺脏转移的抑制效应，探讨其抑制骨肉瘤生长及肺转移的机制，为临床应用片仔癀治疗骨肉瘤提供实验依据。
方法:1.建立和鉴定自发肺转移的裸鼠骨肉瘤模型:BALB/c-nu/nu裸鼠30只，4周龄，雌性，体重18±2g，随机分为生理盐水组(n=5)和模型组(n=25)，麻醉后模型组裸鼠右侧胫骨骨髓腔内注射UMR106-01骨肉瘤细胞悬液100ul（5×106个/ml），生理盐水组裸鼠相同部位注射等剂量生理盐水作为对照组。原位移植后第1、2、3、4、5周末分别随机处死模型组裸鼠5只;观察原位肿瘤生长侵袭、肺转移情况，并取原位瘤块、肺脏组织做病理学检测。2.BALB/c-nu/nu裸鼠32，4周龄，雌性，体重18±2g，采用第一步裸鼠骨肉瘤模型建立的方法造模，裸鼠原位移植1周后随机分为:生理盐水组(n=8)、甲氨蝶呤组(n=8)、片仔癀组(n=8)、联合治疗组(n=8);观察各组裸鼠一般状况;原位移植后每隔1周测量一次原位肿瘤体积，绘制肿瘤的生长曲线，并计算抑瘤率;给药结束次日剖取4组荷瘤鼠肺脏和原位瘤块，在放大镜下计数肺脏表面转移灶数，并行HE染色病理学观察，通过免疫组化法检测4荷瘤鼠原位瘤块中Survivin、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白的表达情况。
结果:
1.建立和鉴定自发肺转移的裸鼠骨肉瘤模型:通过原位移植法建立的自发肺转移裸鼠骨肉瘤模型，原位移植1周移植处见肿瘤形成，原位移植5周原位成瘤率为100％及肺转移率为100％，原位瘤块及肺组织病理学观察可见典型的骨肉瘤病理学特征。
2.各组裸鼠一般情况:生理盐水组（A组）裸鼠原位瘤块体积增长显著，裸鼠明显跛行，精神萎靡;甲氨蝶呤组（B组）裸鼠原位瘤块体积增长较慢，裸鼠轻微跛行，精神状态欠佳;片仔癀组（C组）裸鼠原位瘤块体积增长有所减慢，裸鼠跛行，精神状态尚可;联合治疗组（D组）裸鼠原位瘤块体积增长明显减慢，裸鼠轻微跛行，精神状态较好。原位移植5周后生理盐水组、甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组裸鼠原位瘤块体积分别是6.3±0.37cm3、4.74±0.35cm3、5.08±0.55cm3、3.59±0.55cm3，各实验组与生理盐水组相比P＜0.05，甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组荷瘤裸鼠体重两两比较P＜0.05。甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组裸鼠体重分别是24.00±0.33g、25.50±0.33g、27.20±0.21g，与生理盐水组相比P＜0.05;甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组荷瘤裸鼠体重两两比较P＜0.05。
3.抑瘤率情况:甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组抑瘤率分别是24.8～、19.7％、43％，与生理盐水组相比P＜0.05;甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组抑瘤率两两比较P＜0.05。
4.肺脏转移情况:甲氨蝶呤组、片仔癀组、联合治疗组肺表面转移灶数分别是50±1.4个、54±1.6个、44±1.6个，与生理盐水组相比P＜0.05;甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组肺脏表面转移灶数两两比较P＜0.05。
5.各组原位肿瘤Survivin、VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白的表达情况:甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组Survivin、VEGF、MMP-9蛋白免疫组化平均灰度值比生理盐水组低(P＜0.05);甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组Survivin、VEGF、MMP-9蛋白免疫组化平均灰度值两两比较P＜0.05。甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组TIMP-1蛋白免疫组化平均灰度值比生理盐水组高(P＜0.05);甲氨蝶呤组、片仔癀组和联合治疗组TIMP-1蛋白免疫组化平均灰度值两两比较P＜0.05。
结论:
1.原位移植法建立裸鼠骨肉瘤模型符合临床骨肉瘤特征，造模方法简便，可操作性强，重复性好，成瘤率及肺转移率高，是本实验研究的理想模型。
2.片仔癀与甲氨蝶呤联合应用对原位骨肉瘤有抑制作用。
3.片仔癀对骨肉瘤的肺转移有抑制作用，与甲氨蝶呤联合应用对骨肉瘤肺转移的抑制有协同作用。
4.片仔癀可能是通过抑制Survivin、VEGF、MMP-9蛋白表达，增强TIMP-1蛋白表达，发挥对骨肉瘤生长及肺转移的抑制效应。
片仔癀;骨肉瘤;作用机制;原位移植法;动物模型
福建中医药大学
硕士
中医骨伤科学
张俐
2013
中文
R285.6;R273;R738.1
39
2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）