脊髓缺血再灌注损伤腰动脉模型建立及丹参酮ⅡA作用研究
目的:
1、应用血管铸型技术分析供应家兔脊髓组织的血管，夹闭家兔腰动脉建立脊髓缺血再灌注损伤模型，应用数字减影技术进行鉴定。
2、应用液质联用技术分析丹参酮ⅡA的药代动力学。
3、探讨丹参酮ⅡA对脊髓缺血再灌注损伤的作用以及其可能的机制。
方法:
1、实验动物与分组:新西兰家兔90只，雌雄不限，3个月月龄，体重为2.0±0.2kg，分为模型建立及鉴定组(n=12)，丹参酮ⅡA药代动力学实验组(n=24)，机制探讨组(n=54)。
2、模型建立及鉴定:首先选取2只家兔做血管铸型标本，分析血管走型，接着随机选择10只分为夹闭腹主动脉:和夹闭腰动脉，腹主动脉组沿左肾动脉下方夹闭腹主动脉、腰动脉组夹闭L3-6腰动脉，分别于夹闭前、夹闭中、松开血管夹时做数字减影，并于术后0.5小时取家兔脊髓，做HE染色，分析图片选取最佳动物模型。
3、丹参酮ⅡA药代动力学分析:随机分为0.5h组、1h组、4h组、8h组，各组6只家兔，首先各组均抽取空白脑脊液，然后沿耳缘静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液，并与给药后0.5、1、4、8h再次抽取脑脊液，用液质联用技术检测脑脊液中丹参酮ⅡA的含量。
4、机制探讨:54只家兔随机分为假手术组6只，缺血组24只，丹参酮ⅡA组24只，假手术组只分离腰动脉，缺血组分离并夹闭腰动脉0.5h后松开动脉夹，丹参酮ⅡA组于术前0.5h沿耳缘静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠，分离并夹闭腰动脉0.5h后再次注射丹参酮ⅡA磺酸钠，以上各组在0.5、1、4、8h抽取血液后取L3-6段脊髓组织，抽取的血液加入含有抗凝剂的采血管中，用血液流变仪检测全血粘度、毛细管血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数、红细胞变形指数、红细胞电泳指数;同一只家兔的脊髓组织分为两段，一段固定于4％多聚甲醛中，用免疫组化定性检测NF-κβ、VCAM-1，另一段冻存于液氮中，用酶联免疫法定量检测VCAM-1的含量。
5、利用Spss16.0统计数据、图像处理系统分析处理图片。
结果:
1、成功的建立及鉴定了腰动脉夹闭脊髓缺血再灌注损伤模型。
2、给药后2h和7h的脑脊液与空白脑脊液相比较有差异，2h给药样品保留时间为8.92分钟，其分子量为399.2，7h给药样品保留时间为31.29分钟，其分子量为419。
3、脊髓缺血再灌注损伤后NF-κβ表达，同一时点免疫组化图片中丹参酮ⅡA组表达最少，缺血组中表达最高;脊髓缺血再灌注损伤后VCAM-1表达，假手术组相比，缺血组各时点VCAM-1表达显著升高，在0.5h、1h、4h时差异非常显著（p＜0.01），8h时具有差异性(p＜0.05);此外，丹参酮ⅡA组与缺血组相比，0.5h显著降低(p＜0.01)，1h、4h、8h时降低且具有差异性(p＜0.05)。假手术组始终无阳性血管表达，0.5h缺血组、丹参酮ⅡA组亦无阳性血管表达，1h、4h、8h缺血组阳性血管表达率最高，其中1h、4h中丹参酮ⅡA组与缺血组相比较差异显著(p＜0.05)，8h差异非常显著(p＜0.01);脊髓缺血再灌注损伤后血液流变学变化，缺血组各时点全血粘度在10 s-1、60 s-1、150 s-1升高，毛细管血浆粘度升高(p＜0.05或p＜0.01)。丹参酮组各时点毛细管血浆粘度、红细胞聚集率、细胞刚性指数、变形指数降低极其显著（p＜0.01）。
结论:
1、夹闭腰动脉模型精确可靠、缺血完好、可操作性强、排除了其它脏器缺血导致的影响，因此该模型可以作为研究脊髓缺血再灌注损伤最佳模型，值得推广应用。
2、丹参酮ⅡA可以通过循环系统可以进入脊髓组织，从而达到保护脊髓组织的功能。
3、丹参酮ⅡA减轻脊髓缺血再灌注损伤，可能是通过减少炎性因子NF-κβ、VCAM-1，改善血液流变学，达到保护脊髓组织的损伤。
髓缺血再灌注损伤;腰动脉;丹参酮ⅡA
福建中医药大学
硕士
中医骨伤科学
张俐
2013
中文
R285.5;R681.55
45
2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）