胚胎发育末期维甲酸诱导腭裂小鼠腭突细胞增殖与分化的变化
背景:全反式维甲酸(all-transretinoicacid，ATRA)是维生素A的衍生物，现已被证明具有显著的致畸作用。在胚胎腭发育早期，母体摄入过量维甲酸可导致腭间充质细胞增殖水平下降而产生腭裂。但在胚胎发育末期，腭突细胞尤其是腭间充质细胞的增殖和分化程度尚未见报道。
目的:在胚胎18.5天维甲酸诱导腭裂小鼠中，利用BrdU法标记慢周期细胞，并结合PCNA、Sox-2和P75等细胞增殖和分化标记物，检测腭突上皮和间充质细胞的增殖与分化水平。
方法:选取10周龄左右SPF级ICR孕鼠，在胚胎10天时按100mg/kg体重维甲酸灌胃孕鼠建立腭裂动物模型。在胚胎12天按80mg/kg体重对孕鼠腹膜下注射BrdU，用以标记在胚胎18.5天处于低分裂的慢周期状态细胞。在胚胎发育末期即出生前的胚胎18.5天，将腭裂组与对照组小鼠进行灌流固定脱水包埋，利用多重免疫荧光法分别检测BrdU与Sox-2、P75及PCNA阳性细胞的分布;解离胚胎腭突上皮和间充质组织，利用实时定量PCR法检测Sox-2和75的表达水平。
结果:(1)BrdU与PCNA双重荧光染色结果显示在E18.5天正常对照组中，BruU局限性表达在腭中缝处的间充质细胞以及骨化中心的成骨细胞中，PCNA局限性表达在腭上皮基底层细胞及散在于腭间充质细胞中，二者几无重叠;在E18.5天腭裂组中，在腭突远端的间充质中广泛分布大量BruU阳性细胞，但少见PCNA阳性细胞;而骨化中心的多数成骨细胞呈BruU与PCNA双重强阳性;(2)Sox-2阳性细胞主要分布在腭上皮中，少量散在于腭间充质中，但与BrdU无重叠;腭裂组表达水平较正常组增高，具有统计学意义;(3)P75特异性表达在腭间充质细胞中，与BrdU无重叠;腭裂组表达水平较正常组增高，具有统计学意义。
结论:在维甲酸诱导腭裂小鼠的胚胎发育末期，腭间充质细胞增殖水平低下，分布着多数神经嵴来源的具有分化潜能细胞，同时还分布着大量处于慢周期状态细胞，为先天性腭裂的再生修复提供了依据。
全反式维甲酸;胚胎发育末期;腭裂;腭突细胞;腭间充质细胞;增殖分化
大连医科大学
硕士
口腔基础医学
肖晶
2012
中文
R782.22
34
2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）