转GL融合蛋白基因水稻基因表达产物的致敏性和急性毒性研究
食品安全问题越来越引起全世界的关注，而转基因食品安全问题中一个重要的方面，尤其是作为世界大多人口的粮食安全，转基因水稻的致敏和毒性安全问题受到了越来越多人的关注。本研究在国家转基因生物新品种培育重大专项基金(2009ZX-08011-003B)的资助下，参考WHO/FAO转基因食品致敏评价策略，通过氨基酸序列相似性研究、转GL基因水稻总蛋白的消化稳定性研究和转GL基因水稻外源表达产物的消化稳定性和急性毒性研究进行转GL融合蛋白基因水稻表达产物的安全性评价。
参考中华人民共和国国家标准，按总蛋白浓度为5g/L、25g/L进行模拟胃液消化和2g/L、10g/L的总蛋白模拟肠液消化，分析转GL融合蛋白基因水稻蛋白的消化稳定性。结果显示5g/L的总蛋白在胃蛋白酶作用下2min内完全消化;而25g/L的总蛋白消化60min后，仍可观察到未降解片段;肠液中2g/L、10g/L的总蛋白在15s-2min降解完全。两步法模拟消化采用胃液消化1h后，再进行肠液消化。结果显示，胃液作用1h的25g/L总蛋白降解片段在肠液作用5min时，被降解完全。转基因水稻蛋白在相当于标准浓度的5倍(25g/L)进行消化时，经1h的胃液孵育，在肠液作用5min时能完全降解，该静态模拟消化两步法更符合人体消化模型，可以用于消化稳定性的评价。
通过胶回收GL融合蛋白的消化稳定性和急性毒性研究，初步评价转GL融合蛋白基因水稻外源蛋白的安全性。采用模拟胃/肠液消化实验分析GL融合蛋白的消化稳定性，用SDS-PAGE电泳和Westernblot检测消化结果;尾静脉注射GL融合蛋白，观察ICR小鼠的急性毒性。结果表明，GL融合蛋白在模拟胃液消化反应10min完全分解，在模拟肠液消化反应0s完全分解;急性毒性实验显示小鼠体重增长无差异，蛋白组脏器系数、生化指标与对照组相比，无生物学意义上显著差异，且都在正常范围内。外源蛋白在模拟胃肠液消化实验中具有消化不稳定性，且对小鼠没有产生不良影响。
GL融合蛋白氨基酸序列与目前国际公认的8大已知致敏原（花生、大豆、奶、蛋、鱼、贝类、谷类和树果）的氨基酸序列相比对，没有大于35％的相似序列，也没有任何6个连续相同的氨基酸，说明GL融合蛋白与已知过敏原没有相似氨基酸序列;外源蛋白在模拟胃肠液消化实验中具有消化不稳定性，且对小鼠没有产生不良影响。初步确定转GL基因水稻表达产物的安全性。
转GL基因水稻;序列相似性;消化稳定性;致敏评价;急性毒性;基因表达产物
扬州大学
硕士
营养与食品卫生学
纪丽莲
2012
中文
TS201.6;S511.035.3
69
2013-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）