探讨三阴性乳腺癌的临床特征及Topo Ⅱα在其中表达的预后价值
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，全球每年发病人数超过100万，近年来在我国，特别是大城市内的发病率仍呈直线上升趋势。而三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer TNBC)是指雌激素受体(estrogen reeeptor ER)、孕激素受体(progesterone receptor PR)阴性及人类表皮生长因子受体-2(Humanepithelial growth factor，Her-2)低表达的乳腺癌，被认为是一种独立的临床病理类型，以侵袭性强、预后较差为主要特征的乳腺癌。据以往文献报道，三阴乳腺癌有以下生物学特征:肿瘤体积较大、病理类型几乎均为导管癌、组织学分级较高，较非三阴乳腺癌患者无病生存和总生存期均显著降低。由于其治疗选择少，无法从较成熟的内分泌和靶向治疗中获益，因此对此群体的研究非常重要。寻求与三阴性乳腺癌预后及治疗相关的预后指标一直是一个大家热衷的研究课题。蒽环类药物作为乳腺癌化疗最有活性的药物之一，可明显降低复发和死亡风险。但由于其疗效的局限及一些近期和远期的不良反应，如何避免过度治疗，DNA拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseα，TopoⅡα)为包括蒽环类药物在内的多种抗肿瘤药物的潜在作用靶点，其表达水平降低常可引起耐药。其是一个与恶性肿瘤增殖相关的指标，目前其对乳腺癌发生发展的影响已成为研究热点。因此，本研究目的在于分析三阴乳腺癌临床病理学特征及预后，从乳癌生物学行为是否能预测临床预后及治疗效果的角度考虑，探讨TopoⅡα在三阴性乳腺癌组织中的表达规律及其对预后的影响。
目的:
总结三阴性乳腺癌(TNBC)的临床病理和形态学特征。分析三阴乳腺癌的临床特征及预后。探讨TopoⅡα在三阴性乳腺癌中的表达特点及其与临床生物学指标的相关性及其临床意义。
方法:
通过电脑病案数据库检索2005年6月～2009年6月间于南方医院住院并经手术治疗的乳腺癌病例，从中选择临床资料和病理诊断资料都完善的病例，项目包括:病案号、性别、姓名、年龄、种族、家庭地址、联系电话、绝经年龄、肿瘤部位、象限、肿瘤大小、病理号、病理类型、组织分级、临床分期、淋巴结转移情况、复发转移情况，治疗方式、免疫组化ER、PR、HER-2结果等。所有手术病例均为浸润性导管癌，非特殊类型癌。同时剔除临床资料不完整、术前曾接受放化疗等辅助性治疗的病例，剔除乳腺癌复发病例。从中随机选取符合所有条件的病例共170例。
从病理科获得选定的170例乳腺癌组织病理切片以及石蜡块，在光镜下观察切片，总结基底样型乳腺癌的临床病理、组织形态学特点，然后取相应切片号的石蜡块，制作免疫组化用病理白片。采用Envision试剂盒行二步法免疫组化染色。石蜡切片脱蜡至水，柠檬酸缓冲液微波高档抗原修复25分钟，双蒸水冲洗3次，PBS冲洗3次，每次3分钟;过氧化氢酶阻断液微波低档孵育3分钟，清除内源性过氧化物酶活性，双蒸水冲洗3次，PBS冲洗3次，每次3分钟;分别滴加ER、PR、Her-2或TopoⅡα一抗，电热恒温培养箱37℃孵育1小时，PBS冲洗3次;滴加酶标羊抗鼠或兔IgG聚合物二抗试剂，培养箱中37℃孵育30分钟，PBS漂洗3次;室温下DAB试剂显色约5分钟（3-10分钟），自来水冲洗后苏木素轻度复染约1分钟，盐酸酒精分化约6秒，酒精脱水、二甲苯透明后中性树胶封固切片。染色可疑者即行重新标记染色。以PBS取代一抗作阴性对照，以已知阳性反应片作阳性对照。对于Her-2/neu(++)的可疑状态病人。我们运用荧光原位杂交法即FISH法来进一步检测.我们采用PathVysionTMHER-2探针试剂盒进行检测，FISH结果阳性者则为阳性，阴性者则为阴性。
TopoⅡα免疫组化染色以细胞胞核呈清晰棕黄色或棕褐色颗粒为阳性表达，其表达强度参照半定量积分法标准进行评分。
1）阳性细胞百分率:无细胞显色为0分;＜25％的细胞显色为1分;25％-50％的细胞显色为2分;＞50％的细胞显色为3分。
2）染色情况:显色深浅不一或显色不清为0分;浅黄色为1分;棕黄色为2分;深褐色为3分。
综和评分:0-1分为阴性（一）;2-3分为弱阳性(+);4-5分为中度阳性(++);＞5分为强阳性(+++)。
采用SPSS13.0软件进行统计学处理，临床病理学参数、组织病理形态学参数、免疫组化TopoⅡα表达、TopoⅡα与三阴乳腺癌临床病理指标间的关系组间比较采用Chi-squared检验，生存分析采用Kaplan-Meier法，组间曲线比较用Log-rank检验，回顾性分析三阴乳腺癌预后因素。相关性分析采用Spearman相关分析，相关系数用r表示。Cox模型多因素回归分析显示，年龄、肿瘤大小、月经状态、淋巴结转移状态、组织学分级、TopoⅡα表达是否为三阴乳腺癌是预测无病生存率或是总生存率的独立预后因素。以P＜0.05为标准认为有统计学意义。
结果:
1.170例乳腺癌中ER、PR、Her-2三阴性者52例，三阴性乳腺癌在患者的年龄分组中(x2=0.253，P=0.881)、原发肿瘤大小分组中(x2=0.203，P=0.904)、月经状态(x2=1.005，P=0.400)、脉管有无癌栓(x2=0.016，P=1.000)这些临床病理特征上与非三阴性乳腺癌无统计学差异。而在组织学分级(x2=20.667，P＜0.001)。三阴乳腺癌淋巴结转移阳性33例(63.46％)，在淋巴结转移数目分组(x2=10.474，P=0.015)分组中二者差别有显著性差异，高于非三阴性乳腺癌，P＜0.05。
2.三阴性乳腺癌具有独特的组织形态学特点，如肿瘤组织呈膨胀性生长，有明显的推挤性边缘;可见明显的中央胶原瘫痕和大片坏死。癌巢周围间质较为疏松并有大量淋巴细胞浸润。癌组织组织学级别较高，异型性明显，核分裂像多见，并可观察到鳞状上皮化生和梭形细胞化生。
3.随访时间截止至2012年1月，中位随访45(8～82)个月。170例患者中有40例(23.53％)患者出现复发转移，26例(15.29％)患者死亡。三阴乳腺癌患者与非三阴乳腺癌的生存率分别为78.85％(41/52)和87.29％(103/118)。二者平均生存期分别为66.36±3.31月和79.94±2.47月。三阴乳腺癌患者复发转移率40.38％(21/52)显著高于非三阴患者16.10％(19/118)，两组患者的肿瘤复发转移率有显著差别(x2=11.829，P=0.001);其中2年内三阴乳腺癌复发转移率19.23％(10/52)显著高于非三阴乳腺癌患者2.54％(3/118)，差异有统计学意义(x2=14.234，P＜0.001);2-7年三阴乳腺癌复发转移率21.15％(11/52)与非三阴患者13.56％(16/118)比较差异无统计学意义(x2=1.558，P=0.256)。
4.TopoⅡα在三阴乳腺癌、非三阴乳腺癌中的阳性表达率分别为69.23％(36/52)、41.53％(49/118)，其差异有统计学意义(x2=4.741，P=0.032)。TopoⅡα阳性表达在年龄分组(P=0.513)、月经状态中(P=0.318)、肿瘤大小(P=0.992)分组中总体均数差异均无统计学意义。而在淋巴结转移(x2=6.718，P=0.014)和组织学分级(P=0.017)的分组中，有显著性差异，TopoⅡα的表达与组织学分级呈正相关关系(r=0.281，P=0.044)，与有无淋巴结转移呈正相关关系(r=0.359，P=0.009)。表明淋巴结发生转移、组织学分级越高，TopoⅡα的表达越强。在三阴乳腺癌患者中，TopoⅡα阳性患者7年无病生存时间(DFS)及总生存时间(OS)均低于阴性患者，差异有统计学意义(P=0.03; P=0.004)。Cox多因素分析中，TopoⅡα高表达与三阴乳腺癌患者无病生存(P=0.038)具有相关性。
结论:
1.三阴性乳腺癌组织学分级较高，易发生淋巴道转移，可以作为一种独特的乳腺癌亚型，复发转移发生率高，临床预后差。
2.三阴性乳腺癌具有特征性的形态学特点和免疫表型有利于临床病理鉴别诊断。
3.TopoⅡα高表达与三阴乳腺癌侵袭转移有关，是乳腺癌的预后因素。TopoⅡα可作为三阴乳腺癌无病生存的独立预后因子。
DNA拓扑异构酶Ⅱα;三阴性乳腺癌;临床特征;预后分析;病理学
南方医科大学
硕士
外科学(乳腺疾病方向)
叶长生
2012
中文
R737.9;R730.2
56
2013-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）