人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究
目的:对人外周血淋巴细胞各亚群杀伤肿瘤细胞效应进行比较,寻找具有高效杀伤肿瘤细胞能力的细胞亚群,并探索体外优势扩增该群细胞的方法,同时对体外扩增的该细胞亚群的抗肿瘤效应进行分析,从而建立肿瘤细胞治疗的新方法。
方法:采集健康志愿者的外周血,标记人淋巴细胞谱系标志CD3、CD56、CD8、CD4等对各样本淋巴细胞亚群进行分析和分选。根据自然杀伤细胞(narural killercell,NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)细胞在肿瘤免疫中的作用,本课题关注的淋巴细胞亚群包括CD3-CD56+CD8+细胞、CD3-CD56+CD8-细胞、CD3+CD56+细胞、CD3+CD56-CD8+细胞以及CD3+CD56-CD8bri细胞。分选的淋巴细胞亚群与8种不同个体、不同组织器官来源的人肿瘤细胞系进行体外共培养实验。通过各淋巴细胞亚群与各肿瘤细胞系的共培养实验体系,寻找到具备高效广谱抗肿瘤能力的淋巴细胞亚群,并借助流式细胞仪对其进行了表型和细胞因子分泌谱的检测。利用现有基础研究成果,通过体外添加白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、同种异体树突状细胞等方式,建立体外扩增该细胞亚群的方法学。扩增后细胞经体外精细亚群分选后培养实验,确定其是否来自于体内原有细胞亚群。最后通过体内和体外抗肿瘤实验,确证体外扩增的该细胞亚群能否保持原有的抗肿瘤效应。
结果:对人外周血各淋巴亚群体外杀伤肿瘤细胞效应比较的结果表明,每个样本中CD8+CD56+细胞对60%以上肿瘤细胞系的杀伤效率最高。流式细胞仪检测结果表明,CD8+CD56+细胞活化后可表达CD25和CD69,不表达CD107a,并分泌IL-2、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)等细胞因子。体外精细亚群分选后培养,表明体外扩增的CD8+CD56+细胞仍然来源于原有CD8+CD56+细胞亚群。该亚群可通过添加IL-2和同种异体树突状细胞进行体外活化和扩增,且扩增后该亚群对肿瘤细胞系的杀伤能力能够继续保持。体内抗肿瘤实验表明,扩增后CD8+CD56+细胞能够有效抑制HepG2肿瘤细胞在裸鼠体内的生长。
结论:人外周血各淋巴亚群中CD8+CD56+细胞杀伤肿瘤效应最强,杀伤肿瘤谱最广。CD8+CD56+细胞活化后表达T细胞活化相关标志,分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ等细胞因子,但并不表达CD107a,提示其抗肿瘤效应可能通过诱导靶细胞凋亡,而非颗粒酶释放途径。本课题初步建立了CD8+CD56+细胞体外活化扩增的方法。通过体外添加同种异体树突状细胞和白介素2,能够显著提高CD8+CD56+细胞的扩增能力,并证明扩增后的CD8+CD56+细胞来源于原有的CD8+CD56+细胞,并能够继续保持其原有高效抗肿瘤能力。
肿瘤免疫;淋巴细胞;颗粒酶释放;细胞生物学
泰山医学院
硕士
免疫学
宋文刚;张明徽
2012
中文
R730.3;R392.12
53
2013-04-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)