高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A酶活性以及芹菜素对其影响
目的：建立大鼠微粒体中探针药物检测的高效液相色谱方法，研究大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A酶的活性以及芹菜素对酶活性的影响。
方法：以双氯芬酸钠和咪达唑仑为探针药。CYP2C9的测定采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱分离；流动相为乙腈-水-0.1％三氟乙酸；流速为1 mL·min-1；柱温40℃；检测波长为278 nm；大鼠肝微粒体加入双氯芬酸钠孵育30 min后，用盐酸终止反应，加入内标地西泮(100μ g·mL-1)50μ L和乙酸乙酯1 mL，涡旋后高速离心，取上层有机相吹干复溶进样；计算Km和Vmax。CYP3A的测定采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱分离；流动相为乙腈-水-0.1%三氟乙酸；流速为1 mL·min-1；柱温40℃；检测波长为230 nm；大鼠肝微粒体加入咪达唑仑孵育5 min后，用乙酸乙酯终止反应，加入内标卡马西平(100μ g·mL-1)50μ L，涡旋后高速离心，取上层有机相吹干复溶进样；计算Km和Vmax。结果：4-羟基双氯芬酸钠在0.05～10μ M范围内线性关系良好(r=0.9998)，测得Km=26.87μ M和Vmax=2.359 nmol/min/mg pro。1-羟基咪达唑仑浓度在0.01～0.25μ M范围内线性关系良好(r=0.9996)，测得Km=9.42μ M和Vmax=0.29 nmol/min/mg pro。芹菜素对CYP2C9和CYP3A的具有抑制作用，IC50分别为10.37μ M，5.502μ M。
结论：本方法准确可靠、简便快速，适用于大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A酶活性研究。芹菜素对大鼠微粒体CYP2C9和CYP3A酶具有抑制作用。
肝微粒体;芹菜素;高效液相色谱法;酶活性;药物检测;动物模型
温州医科大学;温州医学院
硕士
药理学
胡国新
2012
中文
R927
39
2013-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）